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《檢測a群豬輪狀病毒膠體金免疫層析試紙條的制備》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、引言1引言輪狀病毒(Rotavims，RV)屬于呼腸病毒科(Reoviridae)輪狀病毒屬(Rotavirus)，是引起嬰幼兒和多種幼齡動物病毒性腹瀉的主要病原之一。我國豬輪狀病毒感染非常普遍，其中主要為A群感染。所有A群輪狀病毒都具有共同的群特異性抗原VP6。VP6是核芯衣殼表面殼粒的重要成分，占病毒蛋白的51％，是病毒群特異性抗原，也是診斷試驗中檢測到的主要抗原?，F已應用于人及動物RV腹瀉的診斷方法主要有電鏡(DEM)和固相免疫電鏡技術(IEM)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、酶免疫實驗(EIA)、聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)、熒光細胞檢查(IF)、病毒分離、放
2、射免疫分析(RaA)、凝集試驗、中和試驗、補體結合試驗(CF)以及PCR探針雜交、RT-PCR等技術。這些技術都能做出夠準確的診斷，但是不適于現場應用。膠體金免疫層析法(gold．immunochromotographyassay，GICA)是20世紀80年代末發(fā)展起來的一種快速免疫學測定方法，它是膠體金標記技術和免疫層析技術相結合的產物。其基本原理是利用微孔濾膜的滲濾濃縮和毛細管作用，使抗原抗體反應在固相膜上快速進行，然后用膠體金標記的抗體來直接顯色，陽性反應在膜上呈現紅色，陰性反應則不形成紅色。GICA全過程只需15min左右。與ELISA相比，即檢測迅速又可避免底物
3、致癌性對人體的危害。本實驗室已應用重組PRVVP6蛋白制備了群特異性單抗，為本實驗展開提供了良好的開端。1．1輪狀病毒的研究進展輪狀病毒屬于呼腸病毒科輪狀病毒屬，是引起嬰幼兒和多種幼齡動物病毒性腹瀉的主要病原之一。1968年美國的Mebus首次從犢牛糞便中分離到輪狀病毒，1973年澳大利亞學者Bishop在胃腸炎患者的十二指腸超薄切片中發(fā)現了人輪狀病毒，隨后在歐美、澳洲、新西蘭等各國發(fā)現了犢牛、綿羊及禽類等多種動物的輪狀病毒。在我國，1979年龐其方等首次在腹瀉患兒糞便標本中檢測到輪狀病毒(龐其方等，1979)，以后又在仔豬、犢牛、羔羊等多種動物糞便中分離到輪狀病毒。目前
4、，輪狀病毒感染引發(fā)的腹瀉已發(fā)展成為一種世界性的疾病，給嬰幼兒健康和畜牧業(yè)造成了嚴重的危害。1975年英國的Woode首次報道豬的輪狀病毒感染由豬輪狀病毒(PorcineRomvims，PRV)弓l起，14周齡仔豬的發(fā)病率超過80％(龐其方等，1979)。我國華東地區(qū)豬血清RV抗體陽性檢出率為68．3％，四川地區(qū)仔豬血清RV抗體陽性檢出率達72％。所以，該病毒在豬群中的感染和傳播引起了世界各國的重視。對RV感染的治療，目前尚無有效的藥物，主要采取防止脫水和酸中毒等對癥支持治療，接種疫苗是有效防控該病暴發(fā)的最重要措施(斯特勞BE等，2000)。RV對嬰幼兒的危害嚴重，醫(yī)學界對
5、該病毒的研究比較重視，國內外學者先后從腹瀉患兒糞便標本中分離出多株RV，對vp4、vp6和vp7主要結構基因進行了研究。我國于1982年分離到小牛的輪狀病毒，又相繼分離到豬、犬、羊、雞等的輪狀病毒，對輪狀病毒的流行病學、病毒分離鑒定、診斷方法的建立和弱毒株的培養(yǎng)等方面作了大量的工作。耋jj鑾些圭蘭奎蘭堡：，蘭竺篁圣囊豢簍1．12輪狀病毒表面抗原與分型Rv粒子表面有3種抗原：群抗原VP6、中和抗原vP7和血凝索抗原VP4。VP6由基因片段6編碼，是病毒的內衣殼蛋白，是重要的群抗原(HsuGGetal，1997)。VP7由基囡片段9(或7、8，依不同毒株而異)編碼，能刺微機體
6、產生中和抗體(EspulCetal，1993)。VP4由基因片段4編碼，可被蛋白水解酶水解，叉l¨{蛋白酶一敏感蛋白口Tote馳e-SensitiveProtein)，具有血凝作用，同時也是誘導機體產生中和抗體的土要抗原(GoFzigliaMetal，1990；JohansenKetal，1997)·根據RV群抗原的不同及病毒ILNA末端指紋圖譜的分析．可將其分為7個群(A43)，A群RV是最早發(fā)現的具有共同群抗原的典型RV，其電泳型為4：2：3：2型；B群_G群又稱為非典型RV。，個群中可感染豬的有4群(A、B、C和E)。根據VP6抗原性不同將^群進一步分為兩個亞引言群
7、(SGI，SG1I)，大多數哺乳動物RV屬I亞群，而大多數人RV屬II亞群。由于其表面蛋白VP7與VP4的高度可變性和均可以獨立誘導產生中和抗體的特德，分別建立了依據蛋白vP7和VP4的兩個獨立的血清型分類系統(tǒng)，即由VP7決定的G型和由VP4決定的P型(I-IoshinoYetal。1996)。根據VP7和VP4的抗原性可將A組輪狀病毒分為14個G型(G1．G14)及21個P型(P1．P21)。金奇等確定世界大多數國家和地區(qū)流行的人輪狀病毒主要為G1型(金奇等，1997)；豬RV檢測出10個G血清型(GI．G6，G8一G11)
