芍藥苷對(duì)ox-ldl致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)作用

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1、河南大學(xué)碩士學(xué)位論文芍藥苷對(duì)ox--LDL致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)作用姓名：翟小菊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：惠學(xué)志201205摘要目的：本研究采用氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein，OX．LDL)誘導(dǎo)人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(humancoronaryarteryendothelialcells，HCAEC)損傷，建立HCAEC損傷模型，觀察芍藥提取物芍藥苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制，為研發(fā)中藥保護(hù)血管內(nèi)皮，防治動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，As)的發(fā)生和發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。方法ll、

2、Ox．LDL對(duì)體外培養(yǎng)HCAEC的損傷：體外培養(yǎng)HCAEC，用不同濃度的OX．LDL誘導(dǎo)HCAEC損傷24h，進(jìn)行細(xì)胞活性和凋亡率的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)分正常對(duì)照組(contr01)、不同濃度的OX-LDL組(濃度依次為25“g／ml、50p∥ml、100ttg／ml和200pg／m1)，用MTr法檢測(cè)細(xì)胞的活性，Hoechst33342／PI雙染檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率。2、檢測(cè)芍藥苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的影響：用不同濃度的芍藥苷作用細(xì)胞24小時(shí)，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活性。3、觀察芍藥苷對(duì)OX．LDL致HCAEC損傷的干預(yù)作用：實(shí)驗(yàn)分正常對(duì)照組、100“g／“OX-LDL損傷組、不同濃

3、度的芍藥苷(50¨g／nd、100¨g，Ⅱd和200p咖1)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)組(先用芍藥苷作用細(xì)胞4小時(shí)后，再加入100I_,g／mlOX．LDL作用細(xì)胞24小時(shí))，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活性；用Hoechst33342／Pl雙染觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的變化，檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率；用相應(yīng)的試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中丙二醛(malondialdehyele，MDA)含量、超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)和乳酸脫氫酶(1actatedehydrogenase，LDH)的活性；用熒光探針法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS和NO的含量變化，用RT．PCR法從

4、基因水平上檢測(cè)細(xì)胞間黏附分子．1(intercellularadhesionmolecule．1，ICAM．1)和血管細(xì)胞黏附分子．1(vascularcelladhesionmolecule．1，VCAM．1)的含量變化。探討芍藥苷對(duì)OX．LDL致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)作用及其作用機(jī)制。結(jié)果：l、Ox．LDL對(duì)體外培養(yǎng)HCAEC的影響：不同濃度的OX．LDL與HCAEC共同培養(yǎng)24h，隨著OX．LDL濃度的增加，MTT值逐漸降低，各藥物組與正常對(duì)照組相比，有顯著性差異(∥0．01)；熒光顯微鏡觀察Hoechst33342／PI雙染細(xì)胞形態(tài)：隨著氧化低密度脂蛋白濃

5、度的增高，凋亡細(xì)胞增加并可見染色質(zhì)凝集，細(xì)胞核碎裂等細(xì)I胞凋亡的特征性變化，細(xì)胞凋亡率逐漸增加，與正常對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(礦，o．01)。2、芍藥苷對(duì)正常細(xì)胞活性的影響：芍藥苷與HCAEC共同培養(yǎng)24小時(shí)，MTT值沒有明顯變化，與正常對(duì)照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0．05)。3、芍藥苷對(duì)細(xì)胞損傷的干預(yù)作用：檢測(cè)結(jié)果顯示，不同濃度的PF干預(yù)組與OX．LDL損傷組相比，MTT值、SOD活性和NO含量均較OX．LDL組顯著增高(剛．01)，LDH、MDA和ROS含量均較對(duì)照組顯著降低(少，0．01)；熒光顯微鏡觀察Hoechst33342及PI雙染可見芍藥苷組H

6、CAEC的凋亡率比OX．LDL組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)果顯示，各組細(xì)胞均表達(dá)ICAM—l和VCAM．1，OX．LDL組內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的ICAM一1和VCAM—l高于正常對(duì)照組p

7、化形成的作用。關(guān)鍵詞：人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，氧化性低密度脂蛋白，動(dòng)脈粥樣硬化nABSTRACTObjective：Toinvestigatetheprotectiveeffectofpaeoniflorin(PF)oninjuryofHCAECinducedbyox-LDLthroughthedetectionofavarietyofindicators．TostudytheeffectsofPFirIatherosclerosisandthepossiblemechanismofitsantiatherosclerosis．Methods：①theeffect

8、ofdifferentconcentr