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《腸桿菌中產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌株的基因型分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、湖北中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文腸桿菌中產(chǎn)超廣譜β--內(nèi)酰胺酶菌株的基因型分析姓名：張亞蘭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：胡佳杰20120513摘要目的：腸桿菌科細(xì)菌成員龐大、最為常見(jiàn)，與人類(lèi)疾病關(guān)系十分密切。腸桿菌科細(xì)菌對(duì)廣譜p．內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥的常見(jiàn)機(jī)制是產(chǎn)生超廣譜p．內(nèi)酰胺酶(extended．spectrump-lactamases，ESBLs)。苷酸序列分析技術(shù)可更加準(zhǔn)確客觀地了解ESBLs基因亞型間的差異以及發(fā)現(xiàn)新的產(chǎn)ESBLs基因，本實(shí)驗(yàn)將運(yùn)用核苷酸序列分析技術(shù)了解武漢市第三
2、醫(yī)院臨床分離的腸桿菌科細(xì)菌的ESBLs基因型及產(chǎn)ESBLs菌感染現(xiàn)狀，為臨床合理用藥以及延緩耐藥控制措施方案的制定提供一定的理論參考。方法：收集武漢市三醫(yī)院201lq-1月至201lq-12月臨床分離的雙紙片協(xié)同初篩試驗(yàn)為陽(yáng)性的產(chǎn)ESBLs腸桿菌科細(xì)菌，采用臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)推薦的標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)(藥敏紙片頭孢他啶、頭孢他啶／克拉維酸和頭孢噻肟、頭孢噻肟／克拉維酸同時(shí)檢測(cè)ESBLs)確證ESBLs陽(yáng)性菌，運(yùn)用引物設(shè)計(jì)軟件，在TEM、CTX．M型和SHV型耐藥基因保守區(qū)設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增的通用引
3、物，提取待測(cè)菌的DNA作為擴(kuò)增模板，對(duì)確證實(shí)驗(yàn)ESBLs陽(yáng)性菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳分離，回收純化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行基因測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因比對(duì)從而對(duì)ESBLs耐藥基因進(jìn)行分型。結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)收集武漢市三醫(yī)院分離的333株ESBLs初篩試驗(yàn)陽(yáng)性的腸桿菌科細(xì)菌主要來(lái)源于創(chuàng)面分泌物，占所有標(biāo)本的36．6％，其次為痰和尿液標(biāo)本。運(yùn)用紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)確證ESBLs陽(yáng)性菌283株，其中大腸埃希菌占67．1％，肺炎克雷伯菌占23．3％，奇異變形桿菌占3．5％，普通變形桿菌占2．
4、2％，陰溝腸桿菌占3．9％。對(duì)紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)確證為ESBLs陽(yáng)性菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，77．39％(219／283)的細(xì)菌擴(kuò)增出ESBLs耐藥基因。CTX．M型占ESBLs陽(yáng)性菌38．17％(108／283)，TEM型占ESBLs陽(yáng)性菌23．32％(66／283)，15．90％(45／283)的1細(xì)菌擴(kuò)增TEM型和CTX—M雙重耐藥基因，22．61％(64／283)I均ESBLs表型確證陽(yáng)性菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性條帶。CTX．M．15和TEM．3是主要的耐藥基因亞型，其次是CTX-M．3和C
5、TX-M-14群耐藥基因。未發(fā)現(xiàn)SHV型耐藥基因。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)與常規(guī)PCR擴(kuò)增試驗(yàn)陽(yáng)性率一致性高于77．39％；通過(guò)武漢市三醫(yī)院2011年度ESBLs陽(yáng)性菌全院科室分布統(tǒng)計(jì)得出ESBLs陽(yáng)性菌檢出率最高的科室是燒傷科，占全院ESBLs陽(yáng)性菌24．鐋，該院最流行的ESBLs致病菌是大腸埃希菌，其次是肺炎克雷伯菌；通過(guò)對(duì)紙片擴(kuò)散法表型確證試驗(yàn)確證ESBLs陽(yáng)性菌株進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因比對(duì)，同源性均在99％以上。并得出該院最
6、為流行的耐藥基因型是CTX．M一15和TEM一3。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為臨床產(chǎn)ESBLs細(xì)菌引起感染的預(yù)防和治療提供可靠參考。關(guān)鍵詞：超廣譜p一內(nèi)酰胺酶耐藥基因聚合酶鏈反應(yīng)基因分型ABSTRACToBJECTIVE：Clinical．solatesofEnterobacteriaceaearethemostcommonmembersinhospitalsandtheyhavebeenassociatedwithhumandisease．Extended．-spectrumbeta．．1actamases(ES
7、BLs)areconsideredtobeoneofthemostimportantantibioticresistancemechanism．Nucleotidesequencingisthegoldenstandardandcarldetectallvariants．Inthestudy,themaingenotypesandtheepidemiccharacteristicsofESBLsisolatesinthethirdhospitalofWuhancityareinvestigated．T
8、hesedataareimportantforimplementingappropriateantimicrobialtherapyandeffectiveinfectioncontrolmeasures．METHOD：TheESBLsphenotypeof333clinicalisolatesofEnterobacteria—ceaewasprimarilyscreenedandtheisolateswerecollectedinthethirdhos
