農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)和下胚軸轉(zhuǎn)化方法的比較及優(yōu)化

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1、第２９卷第４期大豆科學(xué)Ｖｏｌ．２９Ｎｏ．４２０１０年８月ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥＡｕｇ．２０１０農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)和下胚軸轉(zhuǎn)化方法的比較及優(yōu)化段瑩瑩，趙琳，陳李淼，李文濱（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所，教育部大豆生物學(xué)重點實驗室，黑龍江哈爾濱１５００３０）摘要：以東農(nóng)５０、東農(nóng)４２和黑農(nóng)４４的子葉節(jié)和下胚軸為外植體，對農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)和下胚軸２種轉(zhuǎn)化方法進行了比較和優(yōu)化。結(jié)果表明：不同轉(zhuǎn)化方法對大豆的品種要求不同，東農(nóng)５０適合子葉節(jié)轉(zhuǎn)化法，而黑農(nóng)４４－１適合下胚軸轉(zhuǎn)化法。在子葉節(jié)轉(zhuǎn)化體系中，卡那霉素的篩選濃度是１００ｍｇ·Ｌ，在下胚軸轉(zhuǎn)化體系中，卡那霉素－１的篩選濃度是７５ｍｇ·Ｌ，可

2、見下胚軸體系比子葉節(jié)體系在卡那霉素篩選過程中表現(xiàn)得更為敏感。在子葉節(jié)和下－１胚軸轉(zhuǎn)化體系中，最適乙酰丁香酮濃度均為２００ｍｏｌ·Ｌ，最適共培養(yǎng)時間均為３ｄ。在子葉節(jié)轉(zhuǎn)化體系中，５ｄ苗齡時轉(zhuǎn)化率最高，而下胚軸轉(zhuǎn)化體系中，４～６ｄ苗齡時轉(zhuǎn)化率均較高，以６ｄ苗齡最高。關(guān)鍵詞：大豆；子葉節(jié)轉(zhuǎn)化；下胚軸轉(zhuǎn)化中圖分類號：Ｓ５６５．１文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：１０００９８４１（２０１０）０４０５９００４ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＳｏｙｂｅａｎｂｙＵｓｉｎｇＣｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙＮｏｄｅａｎｄＨ

3、ｙｐｏｃｏｔｙｌＥｘｐｌａｎｔｓＤＵＡＮＹｉｎｇｙｉｎｇ，ＺＨＡＯＬｉｎ，ＣＨＥＮＬｉｍｉａｏ，ＬＩＷｅｎｂｉｎ（ＳｏｙｂｅａｎＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮａｔｉｏｎａｌＥｄｕｃａｔｉｏｎａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｈａｒｂｉｎ１５００３０，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｏｙｂｅａｎｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｄｕｓｉｎｇｔｈｒｅｅｓｏｙｂｅａｎ

4、ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ，Ｄｏｎｇｎｏｎｇ５０，Ｄｏｎｇｎｏｎｇ４２ａｎｄＨｅｉｎｏｎｇ４４．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｒｅｑｕｉｒｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｏｙｂｅａｎｖａｒｉｅｔｉｅｓ．Ｄｏｎｇｎｏｎｇ５０ｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｔｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｗｈｉｌｅＨｅｉｎｏｎｇ４４ｗａｓｓｕｉｔａｂｌｅｔｏｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｃ

5、ｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ－１－１Ｋａｎａｍｙｃｉｎｗａｓ１００ｍｇ·Ｌ，ｗｈｉｌｅｉｎｔｈｅｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓ７５ｍｇ·Ｌ，ｔｈｅｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓｍｏｒｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｈａｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｔｏｋａｎａｍｙｃｉｎ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｃｅ－１ｔｏｓｙｒｉｎｇｏｎｅｗａｓｂｏｔｈ２００ｍｏｌ·Ｌ，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅｗａｓｂｏｔｈ３ｄｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏ

6、ｄｅａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ．Ｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｗｈｅｎｔｈｅｓｅｅｄｌｉｎｇａｇｅｗａｓ５ｄ，ｗｈｉｌｅｉｎｔｈｅｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｒａｔｅｗａｓｈｉｇｈｅｒｉｎ４６ｄ，ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｗａｓ６ｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｏｙｂｅａｎ；Ｃｏｔｙｌｅｄｏｎａｒｙｎｏｄｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ；Ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ大豆是重要的

7、糧食和油料作物，也是植物蛋化的首選方法。白、脂類、維生素和礦物質(zhì)等物質(zhì)的天然資源。大子葉節(jié)是諸多農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆遺傳轉(zhuǎn)化報［２］豆的高效遺傳轉(zhuǎn)化一直是大豆植物基因工程領(lǐng)域告中最為成功的受體材料，Ｃｈｅｎｇ等用無菌苗子［１］的難點之一。目前應(yīng)用于大豆遺傳轉(zhuǎn)化的方法葉節(jié)首次報告成功。但由此轉(zhuǎn)化系統(tǒng)獲得的轉(zhuǎn)化主要有根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍法、真空抽濾法植株嵌合體較多，導(dǎo)致后期鑒定、篩選、傳代和純化和花粉