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《lempk12基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化番茄的初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要番茄(LycopersiconesculentumMill．)是我國溫室主栽蔬菜之一。但是高溫、低溫、高鹽等非生物脅迫因素嚴(yán)重影響番茄的生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)量及品質(zhì)。提高番茄的耐非生物脅迫的能力一直是番茄育種和栽培研究的重要內(nèi)容之一。探討番茄耐非生物脅迫的分子基礎(chǔ)和生理生化機(jī)理對(duì)于提高番茄耐熱栽培和育種的效率具有重要的意義。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen．a(chǎn)ctivatedproteinkinase，MAPK)的級(jí)聯(lián)系統(tǒng)被認(rèn)為是植物細(xì)胞將胞外刺激信號(hào)轉(zhuǎn)換成胞內(nèi)反應(yīng)的主要途徑之一，在響應(yīng)各種環(huán)境脅迫的生理狀態(tài)與基因表達(dá)方面起著重要的作用。近年來，在植物中分離到大量的MAPKs并在其作
2、用機(jī)理研究方面取得了很大進(jìn)展。相對(duì)于擬南芥、煙草等模式作物來講，MAPK在蔬菜作物逆境信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用研究還剛剛起步。推測(cè)番茄中存在18種MAPK，大部分功能未知，目前的研究主要集中在生物脅迫方面，而非生物脅迫方面的研究甚少。本研究以番茄為試材，對(duì)番茄LeMPKl和LeMPK2基因進(jìn)行了克隆、表達(dá)特性分析和表達(dá)(過表達(dá)、瞬時(shí)表達(dá))載體構(gòu)建，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化番茄，獲得了有價(jià)值的轉(zhuǎn)基因植株，為今后進(jìn)行番茄MAPK在非生物脅迫方面的功能研究奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1．LeMPKl／2的克隆根據(jù)NCBI基因庫中的LeMPKl／2基因的cds序列設(shè)計(jì)起始全長(zhǎng)引物，從番茄1479中
3、克隆LeMPKI／2全長(zhǎng)。2．兒^卯K2口的表達(dá)特性運(yùn)用RT-PCR法分析LeMPKl／2在時(shí)空上的表達(dá)特性。兩基因的表達(dá)量并沒有隨著生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)間的推移而發(fā)生明顯的變化。LeMPKl在花和青果中的表達(dá)量明顯高于其他組織(根、莖、葉、紅果)的表達(dá)量，LeMPK2在花和青果中的表達(dá)量最多，其次是在紅果中。同一RNA水平上，LeMPKl的表達(dá)量顯著高于LeMPK2。3．植物表達(dá)載體的構(gòu)建將LeMPKl／2全長(zhǎng)定向克隆到由組成型啟動(dòng)子35S驅(qū)動(dòng)的表達(dá)載體PA7．YFP，構(gòu)建瞬時(shí)表達(dá)載體PA7．YFP．LeMPKl和PA7．YFP．LeMPK2，并將他們導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHAl05，以備后面進(jìn)行原
4、生質(zhì)體亞細(xì)胞定位研究。4．番茄的遺傳轉(zhuǎn)化i=磊三篇=忑／／丫／／／／／／／／／／／／／／／／／／／／／／／／／I／／／／／一I／／／／／／／／／／I／I／／11479zZ5886芝』建立了番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系，以番茄子葉為受體材料，采，}丫法童邀塑；￡皇塹2絲絲垂圈垂鯊戴佳的撿建叢基縫絲蠶蘊(yùn)的班究呈AbstractTomato(LycopersiconesculentumMill．)isoneofmaincultivatedvegetablesingreenhouse．Heat，cold．highsaltandotherabioticstressfactorsseriouslyaffe
5、ctthegrowth，yieldandqualityoftomato．ToimprovetheabilityofresistancetOabioticstressesoftomatoisbeingoneoftheimportantcontentofthetomatobreedingandcultivationstudies．Investigatethemolecularbasisandphysiologicalandbiochemicalmechanismoftomatoresistancetoabioticstressisofgreatsignificanceforimprov
6、ingtheefficiencyoftheheattoleranceoftomatocultivationandbreeding．Mitogen—activatedproteinkinase(MAPK)cascadesystem，consideredtobeoneofthemainwaysinplantcellsconvertedextracellularstimulisignalsintointracellularreactions，playsanimportantroleinresponsetovariousenvironmentalstressandgeneexpressio
7、n．Inrecentyears，alargenumberofMAPKshavebeenisolatedinplants．a(chǎn)ndhavemadegreatprogressintermsofitsmechanism．RelativetoArabidopsis，tobaccoandothertermsofthemodecrops，thestudyoftheroleofMAPKinstresssignaltransductioninvegetablehasonlyjustbe
