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1、鄭州大學碩士學位論文巴戟天糖鏈對血管新生中Notch信號通路的作用研究姓名：劉茜申請學位級別：碩士專業(yè)：藥理學指導(dǎo)教師：馮國清201205鄭州人學碩士學位論文巴戟天糖鏈對血管新生中Noah信號通路的作用研究中文摘要巴戟天糖鏈對血管新生中Notch信號通路的作用研究研究生劉茜導(dǎo)師馮國清教授鄭州大學基礎(chǔ)醫(yī)學院藥理教研室河南鄭州450001摘要研究背景與目的：缺血再灌注損傷(ischemia／rcperfusioninjury)是臨床上冠心病人常見的一種嚴重心肌損傷。如何減輕心肌缺血再灌注損傷，恢復(fù)心肌供血，保護心肌細胞成為治療冠心病的關(guān)鍵。治療性血管新生
2、(therapeuticangiogensis)指通過適當干預(yù)，增加功能性血管分支及側(cè)支循環(huán)開放，以恢復(fù)缺血再灌注損傷后缺血心肌供血，達到改善／治療冠心病目的。近年來，本導(dǎo)師組一直致力于巴戟天糖鏈促進治療性血管新生的作用及機制研究，并證實巴戟天糖鏈可促進雞胚絨毛尿囊血管生成作用、增加MVD的數(shù)量：提高乳鼠缺血心肌微血管密度，誘導(dǎo)與血管新生相關(guān)的PDGF．p、TRPC6、VEGF、ERKl／2、bFGE等促進血管新生蛋白表達，促進成肌細胞增殖和分化，促進缺氧復(fù)氧損傷后內(nèi)皮細胞遷移和血管管腔樣結(jié)構(gòu)生成等。巴戟天糖鏈促進血管新生的機制較為復(fù)雜，因此，本課題
3、將通過觀察巴戟天糖鏈對缺氧復(fù)氧損傷后的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Notchl，Jaggedl的蛋白表達，探討巴戟天糖鏈在促進血管生成過程中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的潛在機制并提供理論支持。方法：1人臍靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)及缺氧復(fù)氧損傷模型制備與確定將HUVEC細胞接種到75ml培養(yǎng)瓶內(nèi)，給予含10％新生牛血清的RPMll640高鄭州火學碩十學位論文巴戟天糖鏈對血管新生中Notch信號通路的作用研究中文摘要糖培養(yǎng)基，3712，5％cch，飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。選取3～7代生長狀態(tài)良好，長滿80％左右的細胞，加入5ml缺氧液并不間斷通入95％N2
4、，5％cch混合氣體，造成缺氧損傷。lh后將缺氧液吸去，用室溫PBS清洗一遍，加入5ral復(fù)氧液并置于3712，5％C02，飽和濕度培養(yǎng)箱中，造成復(fù)氧損傷。2h后將復(fù)氧液棄去，加入室溫PBS清洗一遍后，分別加入經(jīng)過不同處理培養(yǎng)基，繼續(xù)置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，24h后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。2實驗分組實驗分6組(1)正常細胞組(2)缺氧復(fù)氧損傷模型組(3)缺氧復(fù)氧損傷模型+麝香保心丸藥液組(陽性藥物對照組)29／L(4)缺氧復(fù)氧損傷模型+MOOd、劑量組50mg／L(5)缺氧復(fù)氧損傷模型+MOO中劑量組150mg／L(6)缺氧復(fù)氧損傷模型+MOO大劑量組450
5、mg／L3檢測方法(1)采用免疫組化SP法定性檢測Notch通路蛋白表達情況。(2)采用Western—Bloting蛋白印跡法定量測定各組Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白表達變化。4統(tǒng)計學處理結(jié)果用SPSSl7．0軟件行統(tǒng)計學分析。計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)士標準差(工士s)表示。檢驗結(jié)果均取a=0．05作為檢驗水準。組間比較采用單因素方差分析，當差異有顯著差異時進一步用LSD法進行兩兩比較。結(jié)果1、倒置顯微鏡下可見正常HUVEC，胞核圓，胞膜清晰，多邊梭形，鋪路石樣。損傷后細胞收縮變圓，形態(tài)不規(guī)則，細胞間隙變大并出現(xiàn)部分脫落。24h后，各給藥組細胞均出現(xiàn)增殖，
6、以MOO各組呈劑量依賴性的更為顯著。2、免疫組化SP法檢測結(jié)果顯示：Notch信號通路的主要信號分子Notchl和Jagged均在胞膜和胞漿中表達，除正常組呈弱陽性表達信號外，其余各組均呈陽性表達信號；模型組與正常組相比光密度值顯著升高(腳．05)；與模型組相比，各用藥劑量組Notchl、Jaggedl光密度值均顯著降低(嘞．05)；MOO3個劑量組之間光密度值均有顯著差異。鄭州大學碩七學位論文巴戟天糖鏈對血管新生中Noah信號通路的作用研究中文摘要3、Western—Bloting蛋白印跡法檢測Notchl和Jaggedl蛋白結(jié)果顯示：模型組與正常
7、組相比，蛋白表達量明顯上升(p(o．05)；與模型組相比，給藥各組蛋白表達水平均顯著降低(氏0．05)，MOO各組蛋白表達呈劑量負相關(guān)。結(jié)論l缺氧復(fù)氧損傷后人臍靜脈內(nèi)皮細胞中Notch信號通路的改變，可能是啟動血管新生的關(guān)鍵因素之一。2MOO顯著調(diào)控Notchl／Jaggedl等主要信號分子蛋白表達，從而影響Notch信號通路的作用，是其促進治療性血管新生的重要機制。【關(guān)鍵詞】人臍靜脈內(nèi)皮細胞巴戟天糖鏈血管新生缺氧復(fù)氧損傷Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路NotchlJaggedl塑叢學碩士學位論文巴戟天糖鏈對血管新生中Notch信號通路的作用研究英文摘要The
8、roleofNotchsignalinginangiogenesisofMorindaofficinalis
