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《(完整)hiv-p24蛋白的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備-8.24修改》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、HIV-1P24蛋白的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備汪龔澤，劉朝奇，楊建林，覃曉琳，呂佰瑞，姚佳紅三峽大學(xué)分子生物學(xué)研究所，湖北宜昌443002摘要：目的：制備HIV-1P24蛋白及單克隆抗體，建立ELISA方法用于檢測HIV感染。方法：用PCR方法擴(kuò)增P24基因，將其克隆到原核表達(dá)載體PET-28a（+）中,經(jīng)大腸桿菌表達(dá)并純化HIV-1P24蛋白。以純化的P24蛋白抗原免疫Balb/c小鼠，取其脾淋巴細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞融合,制備能產(chǎn)生P24.單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,進(jìn)一步采用Westernblotting、ELISA等技術(shù)對制備的單克隆抗體進(jìn)行初步鑒定，建立了P24
2、的ELISA競爭法。結(jié)果：原核表達(dá)重組質(zhì)粒在大腸桿菌中能高效表達(dá)P24蛋白,并進(jìn)一步從雜交瘤細(xì)胞中選取了能穩(wěn)定分泌P24單抗的雜交瘤細(xì)胞株。應(yīng)用ELISA競爭法測定的HIV-1陽性病人血漿P24與病毒載量顯著相關(guān)。結(jié)論：成功制備了P24蛋白及特異性單克隆抗體，建立了P24的ELISA競爭法。關(guān)鍵字：HIV-1P24，原核表達(dá)，單克隆抗體，ELISAExpressionofHIV-1P24proteinandPreparationofitsmonoclonalantibodiesWANGGONGZE,LIUCHAOQI,YANGJIANLIN,QINGXIAOLIN,LV
3、BAIRUIInstituteofMolecularBiology;ThreeGorgesUniversity;YichangHUBEI443002;ChinaABSTRACT:Objective ToconstructProkaryoticexpressionplasmidofHIV-1P24,purifyrecombinantHIV-1P24proteinandprepareitsmonoclonalantibodies.MethodsHIV-1P24cDNAwasclonedintoprokaryoticexpressionvectorpET28a(+)andwa
4、sfurthertransformedintoE.coliBL21(DE3).TherecombinantHIV-1P24proteinwasusedtoimmunizeBalb/cfemalemouse.ThesplenocyteswerefusedwithSP2/0hybridomatoproducemonoclonalantibodyagainstHIV-1p24protein.WesternblottingandELISAwerecarriedouttoidentifythemonoclonalantibodyproducedbythesehybridomas.
5、Results HIV-1P24plasmidwassuccessfullyconstructedandidentifiedbyenzymedigestionandsequencing.HIV-1P24proteinwasexpressedintheE.coliBL21(DE3)andpurifiedbyaffinitychromatography.AftertheimmunizedmurinesplenocyteswerefusedwithSP2/0hybridoma,weselectedhybridomacelllineswhichwereabletoproduce
6、monoclonalantibodiesagainstHIV-1P24stablely.CompetitionELISAassaywasestablishedandthep24proteinofHIV-1positiveplasmawassignificantcorrelatedwiththeHIV-1viralload.ConclusionsWesuccessfullyexpressedHIV-1p24andpreparehybridomaswhichcanstablelyproducemonoclonalantibodiesagainstHIV-1P24.KEYWO
7、RDS:HIV-1P24;prokaryoticexpression;monoclonalantibody;ELISAHIV是艾滋病的病原體，主要通過性接觸、血液和母嬰傳播。近年來，HIV感染患者數(shù)量一直呈上升趨勢。根據(jù)衛(wèi)生部統(tǒng)計，中國自1985年發(fā)現(xiàn)第一例艾滋病病人以來，截至2009年10月底，累計報告艾滋病病毒感染者和病人319877例。2009年當(dāng)年新發(fā)艾滋病病毒感染者4.8萬人，我國艾滋病疫情形勢依然嚴(yán)峻，性傳播正在成為主要傳播途徑[1]。而目前測定血清HIV抗體是診斷HIV感染的常規(guī)實驗方法,但是測定HIV抗體有局限性:有超過7
