吡那地爾后處理在大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學的研究

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1、遵義醫(yī)學院碩士學位論文吡那地爾后處理在大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學的研究姓名：魏義勇申請學位級別：碩士專業(yè)：麻醉學指導教師：喻田；劉興奎201205遵文醫(yī)學院碩士學位論文吡那地糸后處理在大鼠心肌線箍體比接蛋白質(zhì)組學的研究吡那地爾后處理在大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學的研究中文摘要目的：建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，觀察吡那地后處理對缺血再灌注損傷大鼠心臟功能的影響。運用蛋白質(zhì)組學研究方法，探討吡那地爾后處理對大鼠心肌線粒體蛋白質(zhì)的表達變化。方法：1．建立Langendorff大鼠離體心臟缺血再灌注損傷模型。18只成年雄性S

2、D大鼠隨機分為正常組(Nor)、缺血再灌注損傷組(Con)和吡那地爾后處理組(Pina)，每組6只。灌注方案：Nor組：持續(xù)灌注Kerbs．Henseleit緩沖液(K．H液)120min，無缺血再灌注損傷。Con組和Pina組：缺血前先灌注K．H液平衡20min，灌注4。CST．Thomas停跳液，使全心缺血40min后，按以下方案灌注：①Con組：灌注K．H液60min；@Pina組：灌注K·H液前給予50panol／L吡那地爾2min，繼之K．H液58min。觀察各組平衡末及灌注末心率(HR)、左室發(fā)展壓(LVDP)

3、、左室舒張末壓(LVDEP)、以及最大dp／dt等心功能的變化。2．差速離心和Nycodenz密度梯度離心分離純化大鼠心肌線粒體，Westernblot驗證其純度。3．提取線粒體蛋白質(zhì)，采用雙向電泳技術(shù)(2-DE)對蛋白質(zhì)進行分離，利用PDQuest8．0軟件分析各組蛋白質(zhì)表達的差異。選取差異在2倍以上的蛋白質(zhì)點，采用MALDI．TOF．MS鑒定。4．Westernblot法回復驗證部分差異蛋白質(zhì)的表達變化，證實雙向電泳結(jié)果的可靠性。結(jié)果：1．平衡末各組間心功能無明顯差異，續(xù)灌末Nor組和Pina組心功能明顯優(yōu)于遵叉蜃學院

4、碩士學位論文吡那地爾后處理在文冀心肌線矗體比餐蛋白質(zhì)組學的研究Con組(P<0．05)；2．Westernblot證實了Nycodenz密度梯度離心法提取的線粒體富集程度較高；3．對各組線粒體蛋白進行2-DE，每張膠上檢測出480±22個蛋白質(zhì)斑點；PDQuest8．0軟件分析后得到11個差異蛋白質(zhì)，經(jīng)MALDI．TOF．MS分析，均成功鑒定；4．Nor組與Con組比較發(fā)現(xiàn)：NADH脫氫酶鐵硫蛋白2(NDUFS2)表達升高，ATP合酶0【亞單位(ATPA)、電子傳遞黃素蛋白?！緛唵位?ETFA)和細胞色素c1亞基2表達降低

5、。Pina組與Con組比較發(fā)現(xiàn)：NDUFS2、NADH脫氫酶110口亞基(NDUFAl0)和NADH脫氫酶黃素蛋白2亞基(NDUFV2)表達升高。異檸檬酸脫氫酶僅亞基(1DHA)和Delta(3，5)．Delta(2，4)．dienoyl輔酶A異構(gòu)酶(ECHI)表達降低。有兩個蛋白質(zhì)點被鑒定為ATP合酶d亞基，一個蛋白點表達升高，而另一個蛋白點表達降低。5．回復驗證：據(jù)質(zhì)譜結(jié)果，檢測NDUFS2、ATPA和NDUFAl0在各組的表達變化。Nor組ATPA的表達高于Con組(P<0．05)，而NDUFS2表達低于Con組(J

6、P<0．05)；Con組NDUFS2和NDUFAl0的表達高于Pina組(JP<0．05)。這些蛋白質(zhì)的表達變化與2-DE結(jié)果一致。結(jié)論：1．吡那地爾后處理能減輕心肌缺血／再灌注損傷，有保護缺血心肌、改善心功能的作用；2．(1)p比那地爾后處理降低了NDUFS2、NDUFAl0和NDUFV2的代償性升高，這種變化可能與mitoKATPc開放心肌保護作用機制有關，它們可能是mitoK^"c開放心肌保護作用的靶蛋白；(2)吡那地爾后處理可引起ATP合酶d亞基發(fā)生磷酸化，這種修飾可能參與了mitoK^皿C開放的心肌保護作用機制；

7、(3)吡那地爾后處理可促進IDHA和ECHl表達：(4)ATPA、ETFA和細胞色素C1亞基2可能是心肌損傷的標識蛋白，而NDUFS2可能是心肌損傷的保護蛋白；3．Nycodenz不連續(xù)密度梯度離心法可獲得較高純度的心肌線粒體。關鍵詞：心肌缺血再灌注損傷；吡那地爾后處理；線粒體；蛋白質(zhì)組學；2-DE4PinacidilPostconditioningMayChangeExpressionLevelsofObjective：MyocardialMitochondrialProteomeAbstractConstructing

8、ratischemia／reperfusioninjury(IRI)modeltoinvestigatetheprotectiveeffectofpostconditioningonischemicratmyocardiumwhichsufferedIRI．Thepresentstudy,drawing