阻斷缺血后處理大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究

阻斷缺血后處理大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究

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1、遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文阻斷缺血后處理大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究遵義醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。學(xué)位論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均已在學(xué)位論文中作了明確的說明并表示了謝=藝思。學(xué)位論文作者簽名:]馴蕾厶步簽字日期:2口1凈否月乙日遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解遵義醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:遵義醫(yī)學(xué)院有權(quán)保留并向有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被

2、查閱和借閱。本人授權(quán)遵義醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存學(xué)位論文,即:遵義醫(yī)學(xué)院具有學(xué)位論文的數(shù)字化制品復(fù)制權(quán),信息網(wǎng)絡(luò)傳播權(quán)和匯編權(quán)。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書。學(xué)位論文作者簽名:飛兮包J,L簽字日期:沙1、年占月21日囂翥:軍㈣日論文:阻斷缺血后處理大鼠心肌線粒體比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研英漢縮略詞對照表??????????????????4中文摘要?????????????????????5英文摘要?????????????????????7前言??一一??“?一一

3、?一“?一“?”一???一“?一”一·9刖舌??一一??“?一‘“?一??“?”‘????“?一”一’第一部分:離體心臟缺血一再灌注模型構(gòu)建及心肌線粒體樣本的制備材料一?一一?”一?””一”?“一???”?“..?””?..?”11方法”?一一”一“”一“一?..”“??..?··??·??·?·?“·12結(jié)果???????????“?一“?????????17討論”?..”“一???一“?·????“·?····?·?··??··2l第二部分:心肌線粒體蛋白雙向電泳、質(zhì)譜鑒定及回復(fù)驗(yàn)證材料?????“????·??··?····??????······23方法”..

4、????“??????··一·?·????????32結(jié)果”??一?????????“”????????····40討論”..?““一““?一””..?”?”一”?“?一“???..一一482結(jié)論··??·??·??·········??···············??·??····54參考文獻(xiàn)?????????????????????55綜述:ATP敏感性鉀通道在心肌保護(hù)中的研究進(jìn)展???59致謝???????????????????????69作者簡介?????????????????????703英漢縮略詞對照表4阻斷缺血后處理大鼠心肌線粒體七匕較蛋白質(zhì)組學(xué)的

5、研究中文摘要目的:通過研究5一羥葵酸阻斷缺血后處理大鼠心肌線粒體蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,尋找心肌缺血再灌注損傷的標(biāo)識(shí)蛋白和保護(hù)蛋白,為科研和臨床提供依據(jù)。方法:1.建立Langendorff大鼠離體心臟缺血再灌注損傷模型:雄性SD大鼠(N=24)隨機(jī)分為正常組(Nor)、缺血再灌注損傷組(I/R)、缺血后處理組(IPO)、5一羥葵酸阻斷缺血后處理組(5.HD+IPO),每組6只;各組灌注方案:Nor組:持續(xù)灌注Kerbs.Henseleit緩沖液(K-H液)120min。I瓜、IPO及5-HD+IPO組于缺血前灌注K.H液平衡20min,灌注4℃St.Thomas停跳液缺血

6、40min,而后分別按以下方案續(xù)灌:I瓜組:灌注K-H液60rain;IPO組:復(fù)灌前給予K.H液復(fù)灌10S、停灌10s循環(huán)6次,繼而K.H液58min;5-HD+IPO組:復(fù)灌前依次灌注100lamol/L5.羥葵酸3min、K-H液復(fù)灌10S停灌10s循環(huán)6次、K.H液55min。記錄各組平衡末和續(xù)灌末心率(胍)、左室發(fā)展壓(L、rDP)、左室舒張末壓(LVDEP)以及最大dp/dt等心功能的變化,并收集心室肌組織;2.差速離心聯(lián)合Nycodenz密度梯度離心獲取大鼠心肌線粒體,通過透射電鏡檢測線粒體的純度、完整性和富集度;3.對IPO與5-HD+IPO組心肌線粒

7、體蛋白行雙向凝膠電泳(2.DE),掃描獲取數(shù)字化圖像,采用PD—Quest8.0軟件查找差異表達(dá)蛋白點(diǎn),并將蛋白點(diǎn)挖取進(jìn)行質(zhì)譜分析后獲得蛋白相關(guān)信息:4.利用Westernblot回復(fù)驗(yàn)證關(guān)鍵差異蛋白的表達(dá)趨勢,以判斷2-DE結(jié)果的可靠性。結(jié)果:1.透射電鏡證實(shí)Nyeodenz不連續(xù)密度梯度離心法使線粒體的純度進(jìn)一步提高;2.各組心功能指標(biāo)在平衡末無明顯差異,灌注末Nor組及IPO組的心功能明顯好于I/R組和5-HD+IPO組(尸

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