特異性抗原致敏的dc細(xì)胞誘導(dǎo)cik及ctl細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞抑瘤及凋亡作用的研究

特異性抗原致敏的dc細(xì)胞誘導(dǎo)cik及ctl細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞抑瘤及凋亡作用的研究

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時(shí)間:2019-03-01

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文特異性抗原致敏的DC細(xì)胞誘導(dǎo)CIK及CTL細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞抑瘤及凋亡作用的研究姓名:張?jiān)飞暾?qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):外科學(xué)指導(dǎo)教師:王鳳安201203中文摘要特異性抗原致敏的DC細(xì)胞誘導(dǎo)CIK及CTL細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞抑瘤及凋亡作用的研究摘要目的:比較探討特異性抗原致敏的樹突狀細(xì)胞(dentriticcellsDC)誘導(dǎo)的CIK(cytokineinducedkiller)細(xì)胞和(cytotoxiclymphocytes,CTL)對(duì)B16黑色素瘤的殺傷作用以及對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡作用的影響。樹突狀細(xì)胞(DC)是到目前為止發(fā)現(xiàn)的

2、功能最為強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞,具有攝取、加工、遞呈腫瘤相關(guān)抗原,并激活初始免疫功能的獨(dú)特功能。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞CIK和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CTL作為新型高效的免疫活性細(xì)胞,在腫瘤過繼性細(xì)胞免疫治療中得到了廣泛的應(yīng)用。本研究利用DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞和CTL細(xì)胞共同培養(yǎng),并且負(fù)載特異性抗原。期望可以獲得數(shù)量更多、抗腫瘤活性更強(qiáng)、特異性更好的過繼性免疫治療效應(yīng)細(xì)胞。方法:采用特異性腫瘤抗原致敏的DC與CIK和CTL細(xì)胞共同培養(yǎng),分析其免疫表型,建立黑色素瘤動(dòng)物模型,將其分為三組。第一組:DC.CIK效應(yīng)細(xì)胞組;第二組:DC.CTL效應(yīng)細(xì)胞

3、組;第三組:對(duì)照組。分別測(cè)量各組腫瘤的體積和重量。流式細(xì)胞(FCM)檢測(cè)各組癌細(xì)胞增殖周期中Go/Gl期、S期、G2/M期各期細(xì)胞的比率和細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosisIndexAI)、細(xì)胞增殖指數(shù)(proliferationIndexPI)的變化;透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化;并用MTT法檢測(cè)各組抗腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞對(duì)B16黑色素瘤腫瘤細(xì)胞的殺傷力。結(jié)果:DC.CIK和DC.CTL均可以影響到黑色素瘤腫瘤細(xì)胞周期,并且具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用,但DC.CIK與DC.CTL之間未發(fā)現(xiàn)顯著性差異,通過透射電鏡觀察可以發(fā)現(xiàn)兩

4、實(shí)驗(yàn)組都能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的凋亡改變,在應(yīng)用流式細(xì)胞(FCM)檢測(cè)技術(shù)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖周期中的變化進(jìn)行檢測(cè)中可以發(fā)現(xiàn);實(shí)驗(yàn)組兩組與對(duì)照組比較Go/GI期細(xì)胞比率、越顯著升高,S期未發(fā)現(xiàn)明顯變化,G2/M期細(xì)胞比率以及PI顯著下降。DC—CTL細(xì)胞組殺傷活性較DC.CIK明顯升高。且不同效靶比之間比較,隨著效靶比的增高對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用也越強(qiáng)。結(jié)論:特異性抗原負(fù)載的DC.CIK細(xì)胞與DC.CTL細(xì)胞對(duì)B16黑色中文摘要素瘤均有較強(qiáng)的殺傷作用。并且DC.CIK細(xì)胞和DC.CTL細(xì)胞都可以通過影響黑色素瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋

5、亡。關(guān)鍵詞:樹突狀細(xì)胞;細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞;細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞;黑色素瘤;免疫治療:細(xì)胞凋亡英文摘要ContrastAmongInhibitionEffectAndApoptosisEffectofSpecificAntigen··sensitizedDC--CIKCellsandDC·-CTLCellsonTumotCellsABSTRACTObjective:ObjectivetOcontrasttheantitumoreffectandapoptosiseffectofspecificantigen-sensitizedDC

6、—·CIKcellsandDC··CTLcellsonTumorCells.Dendriticcells(Des)arethemostpotentantigenpresentingcells(APC)withtheabilitytoacquire,process,present,antigensandtheuniquecapabilityofinitatingprimaryimmuneresponsesagainsttumor-associatedantigens.Cytokineinducedkiller(CIK)cellsandc

7、ytotoxiclymphocytes.cells(CTL)havethenewtypeimmunocompetencecells.Cytokineinducedkillercellsandcytotoxiclymphocytescellshavewidespreadusinginadoptiveimmunetherapy.Dendriticcells(DCs)withcytokineinducedkiller(CIK)cellsandcytotoxiclymphocytescellswereseparatedandculturere

8、spectively,thendendriticceUs(DCs)wereloadedwithspecifictumorantigen.Byusingthismethods,wecanCO—culturetumorAnt

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