鄰二氮菲測定微量鐵含量

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1、重慶醫(yī)科大學(xué)2010級生物技術(shù)創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)第二小組鄰二氮菲測定微量鐵（重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院2010級生物技術(shù)導(dǎo)師：易剛）作者：李海軍李加本李良華李文偉沈俊捷李明義摘要：目的:利用鄰二氮菲作顯色劑測定樣品中的微量鐵并評價(jià)該方法的各項(xiàng)性能，熟悉研究工作的方法和步驟。方法：利用可見分光光度法中的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，用鄰二氮菲作顯色劑，通過固定其他條件的方法來分析pH，時(shí)間，顯色劑加入量對吸光度的影響。通過標(biāo)準(zhǔn)加樣回收來檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度，連續(xù)測定一份樣品十次來驗(yàn)證方法的精密度。結(jié)果：結(jié)果顯示顯色環(huán)境在pH=4.9，波長509.

2、8nm時(shí)吸光度值最大，顯色時(shí)間在5~60min內(nèi)變化較小，顯色劑用量對吸光度影響不大，回收率在98.70%~101.70之間，測定十份同一樣品的標(biāo)準(zhǔn)偏差s=0.102，變異系數(shù)CV=s/x=0.462%，90%置信水平置信區(qū)間為22.03±0.059（ug/ml），99%置信水平置信區(qū)間為22.03±0.105（ug/ml）。鐵離子濃度在0.1ug/ml~5ug/ml的線性超過0.9998。關(guān)鍵詞：鄰二氮菲微量鐵測定分光光度法顯色劑前言：鐵是人體正常生理過程中不可或缺的物質(zhì)，幾乎任何組織都含有鐵。缺鐵性貧血是鐵

3、缺乏最嚴(yán)重的疾病。鐵過量是引發(fā)或加劇多種慢性疾?。ㄈ缒[瘤、糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)退化性疾病以及慢性肝病等）的危險(xiǎn)因素。目前常用的方法有磺基水楊酸分光光度法、1，10一菲羅啉分光光度法、EDTA配位滴定法測定鐵離子含量1.材料方法1.1儀器：752型紫外可見分光光度計(jì)精密分析天平試劑：硫酸鐵氨濃鹽酸鄰二氮菲鹽酸羥胺醋酸醋酸鈉乙醇1.2方法原理:在pH=3-9范圍內(nèi)鄰二氮菲可與亞鐵離子快速形成穩(wěn)定的配合物比例為3：1，生成的配合物在510nm附近有一吸收峰，據(jù)報(bào)道其摩爾吸光系數(shù)為1.1×,反應(yīng)靈敏且鐵離子濃度與吸

4、光度符合朗伯比爾定律。本實(shí)驗(yàn)中使用NaAc：HAc=1：1的緩沖液，用鹽酸羥胺還原樣品中的鐵離子1.3鐵標(biāo)準(zhǔn)液的配制方法1mg/ml鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱量0.4320gNH4Fe(SO4)2.H2O12至燒杯移取5ml1mol/L鹽酸在燒杯溶解，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶，搖勻，轉(zhuǎn)移至試劑瓶。50ug/ml鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：用5ml移液管移取5ml的1mg/ml鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和10ml1mol/L鹽酸至100ml容量瓶1.4試劑的配制方法：醋酸鈉緩沖液：16.41g醋酸鈉，12.10g冰醋酸溶解至100ml蒸餾水中。

5、1mol/L鹽酸溶液：移取10ml濃鹽酸至100ml容量瓶定容移至試劑瓶。1.5g/L的1,10-鄰菲啰啉：稱量0.15g1,10-鄰菲啰啉溶于5ml乙醇，加lml1mol/L鹽酸，溶解至100ml蒸餾水中。10%鹽酸羥胺溶液：稱取鹽酸羥胺10g溶解至100ml蒸餾水中。1.5檢測步驟：重慶醫(yī)科大學(xué)2010級生物技術(shù)創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)第二小組按順序向50ml容量瓶中依次移入樣品或鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液，鹽酸羥胺溶液，醋酸鈉緩沖液，鄰菲羅琳溶液。加入顯色劑前搖勻，加入顯色劑搖勻并靜置5分鐘后測定其吸光度。1.5系列顯色液：編號123

6、4567準(zhǔn)液加入量（5ug/ml）0ml1ml2ml3ml4ml5ml10ml鹽酸羥胺加入量1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml顯色劑加入量5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml緩沖液加入量5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml濃度ug/ml00.10.20.30.40.51編號891011樣品標(biāo)準(zhǔn)液加入量（50ug/ml）2ml3ml4ml5ml3ml鹽酸羥胺加入量1ml1ml1ml1ml1ml顯色劑加入量5ml5ml5ml5ml5ml緩沖液加入量5ml5ml5ml5ml5ml濃度ug/ml23

7、452.結(jié)果2.1顯色時(shí)間：取10號溶液，用1號溶液作參比溶液用1cm比色皿，測定在1.2.3.4.5.10.30.60min時(shí)的吸光度變化。結(jié)果顯示吸光度在5-20min穩(wěn)定在5-60min內(nèi)變化小于0.4%2.2顯色劑用量：測定溶液在加入不同量的顯色劑時(shí)的吸光度變化。可見顯色劑的用量對吸光度影響不大。顯色劑用量1ml3ml5ml10ml20ml吸光度A0.2240.2250.2240.2250.2292.3pH的影響：根據(jù)NaAc與HAc的不同比例配制緩沖液測定顯色液在不同pH下的吸光度變化。結(jié)果顯示pH對

8、吸光度影響較小且在pH=4.9時(shí)吸光度最大。由于ph范圍較窄，平直部分不易區(qū)分，但吸光度在pH3.6~4.9的變化為1%，較小符合標(biāo)準(zhǔn)。重慶醫(yī)科大學(xué)2010級生物技術(shù)創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)第二小組2.1吸收光譜：分別測定0.3ug/ml，1ug/ml，4ug/ml濃度鐵溶液在400-600nm的吸收曲線確定吸收光譜并確定最大吸收波長為509.8nm。三種濃度的吸收光譜相同。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線：在pH4