柿子葉中熊果酸超聲波輔助提取工藝探究

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1、柿子葉中熊果酸超聲波輔助提取工藝探究【摘要】為了充分利用柿子葉中的熊果酸，以柿子葉為原料，以熊果酸提取率為指標(biāo)，采用超聲波輔助提取了柿子葉中的熊果酸。分別研究了乙醇濃度、料液比、超聲波時(shí)間和超聲波溫度對熊果酸提取率的影響。結(jié)果表明，熊果酸提取的最佳工藝條件是：乙醇濃度85%、料液比為1：12、超聲波時(shí)間為25min.超聲波溫度為45°C,在最佳條件下，熊果酸提取率可達(dá)1.131%o【關(guān)鍵詞】柿子葉；超聲波；熊果酸；提取工藝柿葉為柿樹科，柿樹屬植物柿的新鮮或干燥葉。柿葉味苦、性寒、無毒，治咳喘，肺氣脹以及各種內(nèi)出血?！兜崮媳静荨酚涊d'‘經(jīng)霜葉敷朦瘡”；《本草再新》記載“治咳嗽吐血，止

2、咳生津”；《分類草藥性》記載“治咳嗽氣喘消肺氣脹”。據(jù)報(bào)道，柿葉也有抗癌、抗菌、抗衰老、誘導(dǎo)凋亡[1-3]以及對特異性皮炎的作用。經(jīng)科學(xué)研究柿子葉中含有黃酮類、軟質(zhì)、香豆精類化合物和樹脂、還原糖、多糖及有機(jī)酸、胡蘿卜素等多種物質(zhì)，具有抗氧化、降血脂、通利血脈、清熱解毒、生津止渴的作用[4-5]o此外，柿子葉尚含有五環(huán)三菇類化合物，其中熊果酸是其主要成分之一。熊果酸(UrsolicAcid,UA),又名烏索酸、烏蘇酸，屬A-香樹脂醇型五環(huán)三菇類化合物。純凈的熊果酸為白色針狀晶體，易溶于二氧六環(huán)和毗唳，可溶于甲醇和乙醇,微溶于丙酮、苯、氯仿和乙瞇。近年來，有關(guān)熊果酸的提取已經(jīng)成為天然產(chǎn)

3、物加工領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。隨著對熊果酸生物活性的深入研究，其在醫(yī)藥、食品、保健和化妝品等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用［6-9］。熊果酸在自然界分布很廣,是多種天然產(chǎn)物的主要活性成分。目前，熊果酸主要從女貞子、山楂、夏枯草、車前草和苦丁茶等植物中提?。?0］,而很少有在柿子葉中提取的報(bào)道，本文對柿子葉中熊果酸的提取工藝進(jìn)行研究，旨在為以后的研究工作提供參考。一、材料與方法（一）材料及儀器干柿葉，采集于贛南醫(yī)學(xué)院新校區(qū)（圓形紅柿）洗凈、干燥、粉碎后備用；熊果酸對照品，北京澳天茂森生物技術(shù)研究院；所用化學(xué)試劑中無水乙醇、高氯酸、香草醛、冰醋酸、乙酸乙酯等均為分析純。Lambda35UV/viss

4、pectrometer紫外可見分光光度計(jì)、電子天平、SHB-3型循環(huán)水多用真空泵、DZF-6050型真空干燥箱、HHS-2型電熱恒溫水浴鍋、FW177粉碎機(jī)和Lucky數(shù)控超聲波清洗機(jī)等。（二）實(shí)驗(yàn)方法（1）熊果酸的提取取2g柿子葉粉，加入適量的浸提液，攪拌，控制超聲波溫度為45°C,超聲波處理25min。處理后浸泡1h,然后抽濾，取0.2mL濾液移至試管中，減壓蒸干。冷卻后加0.3mL5%香草醛-冰醋酸和0.8mL的高氯酸，6(TC水浴加熱15min,冷卻至室溫，用乙酸乙酯定容至5mL,在549nm波長處測吸光度。(2)產(chǎn)品的紫外分析精密量取0.5mL柿子葉提取溶液，同時(shí)量取0.

5、5mL濃度為0.2mgM的熊果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于具塞試管中，加熱揮去溶劑后，加5%香草醛-冰醋酸0.3mL和高氯酸0.7mL,然后在6CTC水浴中加熱15min,取出冷卻至室溫。用乙酸乙酯定容至5mL,搖勻，用Cary50紫外分光光度計(jì)進(jìn)行紫外掃描分析，掃描熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品和產(chǎn)品的最大吸收波。(3)熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品10mg,用無水乙醇定容于100mL容量瓶中，即得0.1mg/mL的熊果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密吸取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0mL置于具塞試管中，加熱揮去溶劑后,加5%香草醛-冰醋酸0.3mL和高

6、氯酸0.8mL,6(TC水浴中加熱15min,取出冷卻后移至5mL聚酯試管中，用乙酸乙酯定容，搖勻后在549nm處測定吸光度，同時(shí)以試劑空白作參比，以吸光度為縱坐標(biāo)，熊果酸濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。從圖1可以看出，R2=0.9991,說明熊果酸濃度在2?10ug/mL,具有良好的線性關(guān)系。（4）熊果酸提取率的計(jì)算方法式中：Y熊果酸提取率，%;V提取液體積，ml；X熊果酸濃度，Pg/ml；W柿子葉樣品質(zhì)量，go二、結(jié)果與討論（一）產(chǎn)品的紫外分析對標(biāo)準(zhǔn)品和產(chǎn)品進(jìn)行紫外分析，結(jié)果如圖6和圖7所不O由圖6可知，熊果酸的最大吸收波長在549nm附近。由圖7可知柿子葉提取液在54

7、9nm處出現(xiàn)明顯的紫外吸收,由此可以判斷出柿子葉中的提取物為熊果酸。（二）單因素實(shí)驗(yàn)（1）乙醇濃度對熊果酸提取率的影響按上述試驗(yàn)方法，在超聲波時(shí)間為30min、超聲波溫度為5CTC和料液比為1：12的條件下，分別取乙醇濃度為75%、80%、85%、90%和95%進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算提取率，結(jié)果如圖2所示。圖.2乙醇濃度對提取率的影響從圖2可看出當(dāng)濃度85%時(shí)，熊果酸的提取率明顯下降。故乙醇濃度以85%為宜。(2)料液比對熊果酸提取率的影響按上述實(shí)驗(yàn)方法，在超聲波時(shí)間為30m