鹽霉素抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究

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1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級碩士學(xué)位論文鹽霉素抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究SalinomycininhibitsproliferationandinducesapoptosisofhumannasopharyngealcarcinomacellinVitroandsuppressestumorgrowthinViVo課題來源：自選學(xué)位申請人吳丹心導(dǎo)師姓名汪森明專業(yè)名稱腫瘤學(xué)培養(yǎng)類型學(xué)術(shù)學(xué)位型培養(yǎng)層次所在學(xué)院答辯委員會主席答辯委員會委員碩士第二臨床醫(yī)學(xué)院陳尊器教授廖旺軍教授張為民教授張秀萍教授鄭燕芳教授2014年3月30

2、日廣州碩士學(xué)位論文鹽霉素抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡的實(shí)驗(yàn)研究研究碩士研究生：吳丹心導(dǎo)師：汪森明教授摘要研究背景：鼻咽癌為我國最常見的惡性腫瘤之一，源自鼻咽粘膜上皮細(xì)胞的惡變，是頭頸部腫瘤一個(gè)比較明確的亞類。鼻咽癌有著獨(dú)特的流行病學(xué)、臨床特點(diǎn)、組織病理學(xué)以及病因?qū)W，它的發(fā)生、發(fā)展、臨床表現(xiàn)及相應(yīng)的治療與其他頭頸部腫瘤有一定的區(qū)別，好發(fā)于東南亞、我國的南方及香港地區(qū)，在這些地區(qū)每年的發(fā)病率高達(dá)20／100000。越來越多的證據(jù)表明鼻咽癌的與多種因素有關(guān)，包括遺傳學(xué)因素、EB病毒感染、吸煙、飲酒、中草藥的使用及環(huán)境因素。依據(jù)世

3、界衛(wèi)生組織的病理學(xué)分類，鼻咽癌被劃分為三類：角化鱗狀上皮，非角化型，未分化型。鼻咽癌病理類型以未分化鱗癌為主，主要通過淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移到頸部淋巴結(jié)，也可通過血液轉(zhuǎn)移至肝、肺、骨。盡管作為鼻咽癌的標(biāo)準(zhǔn)治療放射治療，在早期鼻咽癌中取得了滿意的效果，能極大地提高總生存期及無病生存期，但是對于中晚期患者，放化療綜合治療卻并未取得理想的效果，許多病人出現(xiàn)放化療的抵抗，并且毒副作用較重，最終產(chǎn)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。因此，有必要尋找更加有效有針對性的藥物，同時(shí)探討可能的作用機(jī)制，更好地治療鼻咽癌。鹽霉素(Salinomycin，Sal)，又名沙利霉素

4、，為一種聚醚類抗生素，常被用作飼養(yǎng)家禽以提高營養(yǎng)攝取率，近年來研究表明相比傳統(tǒng)的乳腺癌常規(guī)化療藥紫杉醇，鹽霉素能有效降低乳腺癌干細(xì)胞的比例，在體內(nèi)，其還能抑制乳腺癌細(xì)胞的生長、降低微球形成比例及抑制淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究表明，鹽摘要霉素還能通過多種機(jī)制降低某些腫瘤的惡習(xí)程度，誘導(dǎo)這些腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，在殺傷腫瘤細(xì)胞方面表現(xiàn)出高效性，同時(shí)不影響正常細(xì)胞的生長。然而目前有關(guān)鹽霉素對鼻咽癌影響的報(bào)道甚少。故本研究擬觀察鹽霉素在體內(nèi)外對鼻咽癌細(xì)胞的生長抑制作用，并對其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，從而為鹽霉素應(yīng)用于鼻咽癌治療提供可能的思路

5、。腫瘤的發(fā)生發(fā)展離不開各種信號通路的激活或異常改變。研究表明w州B．catellin信號通路在機(jī)體細(xì)胞的發(fā)育、再生及組織的穩(wěn)態(tài)等方面有著重要的作用。越來越多的證據(jù)表明W州p—cateIlin信號通路的異常激活與多種腫瘤的產(chǎn)生密切相關(guān)，包括頭頸部腫瘤、乳腺癌、肝癌、腸癌及肺癌等人類腫瘤。B—catellin蛋白是Wn邯．catellin信號通路中一個(gè)關(guān)鍵的中介物。異常的Wnt表達(dá)會導(dǎo)致p．catemn在細(xì)胞質(zhì)中積累，并進(jìn)入細(xì)胞核，與T細(xì)胞因子(TceUfactor／1ymphoide1111a11cerfactor，TcF／

6、LEF)結(jié)合，調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，TcF／LEF是一類具有雙向調(diào)節(jié)功能的轉(zhuǎn)錄因子，若結(jié)合B．cateIlin則促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。LRP6(低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白，LDL．receptor-relatedprotein，LRP6)作為W州p．catellin通路中的另外一個(gè)受體，屬于單次卷曲的跨膜受體，對于wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)起著重要作用，其磷酸化能導(dǎo)致D．catenjn復(fù)合物的破壞、D．catellin蛋白的胞內(nèi)聚集以及核轉(zhuǎn)位，最終導(dǎo)致Wnt靶向基因的表達(dá)，從而引起細(xì)胞的凋亡、粘附及周期等方面的改變。盡管wm信號通路參與鼻咽癌的發(fā)生

7、發(fā)展的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步闡明，但是越來越多的證據(jù)表明B．ca鈀Ilin蛋白異常表達(dá)與鼻咽癌的不良預(yù)后密切相關(guān)。研究目的：本實(shí)驗(yàn)以人鼻咽癌細(xì)胞株cNE一1(高分化細(xì)胞)、cNE．2(低分化細(xì)胞)、CNE．2／DDP(低分化耐藥細(xì)胞)作為研究對象，分析鹽霉素對鼻咽癌細(xì)胞活力和侵襲能力的影響：在體外，從定性和定量兩方面觀察和分析鹽霉素作用鼻咽癌細(xì)胞后是否有凋亡現(xiàn)象的產(chǎn)生及程度分析，從而進(jìn)一步分析鹽霉素介導(dǎo)的鼻咽癌細(xì)胞的凋亡途徑及凋亡機(jī)制；在體內(nèi)，建立鼻咽癌CNE．2細(xì)胞的移植瘤模II碩士學(xué)位論文型，觀察用藥后移植瘤的生長情況及

8、蛋白表達(dá)情況，分析Wnt信號通路的變化。從而為鹽霉素的進(jìn)一步研究與臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并奠定理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法：1．CCK一8實(shí)驗(yàn)研究鹽霉素作用鼻咽癌細(xì)胞24h、48h和72h后，三株鼻咽癌細(xì)胞Q旺．1、Q正一2、cNE．2／DDP的體外增殖情況，計(jì)算存活率，并選取合適的低、高兩個(gè)藥物濃度作為后續(xù)研究