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《饑餓環(huán)境下lewis細(xì)胞分泌的hmgb1對細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)作用的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號墅窆2：!!UDC612密級公玨編號!Q2窆窆S114030@江蕁大擎碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATIoN論文題目紐熊騷境王曼星墮i墨細(xì)胞盆鯊的趔魚旦!過細(xì)胞自咝遢苴佐趣笪硒宜專業(yè)名稱!逝廢撿驗(yàn)趁逝堂作者姓名一一．汪江指導(dǎo)教師迕絲遺熬援論文答辯日期2Q!壘生魚月!!目2014年6月分類號392．11UDC612碩士學(xué)位論文編號10299S1l14030饑餓環(huán)境下Lewis細(xì)胞分泌的HMGBl對細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)作用的研究STUDYoNTHEREGULATORYROLEoFHIGH．MOBILITYGROUPPROTEINB1(HMGBl)SECRETEDBYSTARVA
2、TIoN．TREATEDLEWISCELLSINAUTOPHAGY作者姓名：汪汀指導(dǎo)教師：許化溪教授小組成員：王勝軍教授蘇兆亮副教授申請學(xué)位：碩士學(xué)科專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文答辯日期：2014年6月11日學(xué)位授予單位：江蘇大學(xué)學(xué)位授予日期：2014年6月16日答辯委員會主席：姚墊教授獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。
3、本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：7祝1簽字日期：工訓(xùn)中年6月叮日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完傘了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位淪文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部1、J或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)江蘇大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部內(nèi)容或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮I=
4、J或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。不保密團(tuán)。學(xué)位論文作者簽名：≯釘／指導(dǎo)教師簽名：MP年Ⅷ7日街政【智山嚴(yán)年‘月l戶江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文目的：摘要高遷移率組蛋白B1(highmobili
5、tygroupproteinB1，HMGBl)是一種染色質(zhì)相關(guān)的核蛋白，也是一種炎癥因子，可參與細(xì)胞自噬進(jìn)程的調(diào)節(jié)作用。自噬是腫瘤細(xì)胞抵抗缺氧、化學(xué)藥物、營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等應(yīng)激條件的一種生存途徑。本研究以小鼠肺癌細(xì)胞Lewis細(xì)胞系為研究對象，探討在饑餓狀態(tài)下小鼠Lewis細(xì)胞HMGBl表達(dá)及分泌情況；分析應(yīng)激條件下分泌的HMGBl對小鼠Lewis細(xì)胞自噬的調(diào)控作用以及其可能依賴的分子機(jī)制。方法：(1)饑餓處理的Lewis細(xì)胞HMGBl表達(dá)及定位的檢測：HBSS替換完全培養(yǎng)液0h、3h、6h、9h后WestemBlot、免疫熒光分別檢測培養(yǎng)上清及Lewis細(xì)胞中HMGBl水平的變化：將HB
6、SS處理后的Lewis細(xì)胞進(jìn)行核漿分離，WesternBlot分別檢測細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中HMGB1的表達(dá)水平。(2)饑餓及外源性重組HMGBl處理的Lewis細(xì)胞自噬水平檢測：HBSS和重組HMGBlfl}tg／m1)分別處理細(xì)胞后，通過免疫熒光及WesternBlot測定細(xì)胞中LC3．IFLC3．II、p62和Beclin．1等自噬相關(guān)分子的表達(dá)情況。(3)siRNA干擾HMGBl表達(dá)及EP抑制HMGBl分泌后細(xì)胞自噬水平的檢測：用Lipofectamine2000將HMGBl特異性siRNA轉(zhuǎn)入Lewis細(xì)胞，培養(yǎng)48h后，免疫熒光檢測LC3的表達(dá)；EP抑制HMGBl分泌，并用HBS
7、S處理細(xì)胞后WesternBlot檢測LC3水平。(4)Lewis細(xì)胞HMGBl受體的檢測及其相關(guān)分子機(jī)制的研究：HBSS處理Lewis細(xì)胞4h后PCR檢測TLR2、TLR4、RAGE的表達(dá)；分別用HBSS處理細(xì)胞0h、3h、6h、9h，WesternBlot檢測p-ErkI／2、NF．KB及Beclin．1的表達(dá)水平，并用RAGE特異性抗體或Erk抑制劑處理后檢測細(xì)胞自噬7k平。饑餓環(huán)境下Lewis細(xì)胞分泌的l-IIdGBl對細(xì)胞自噬調(diào)節(jié)作用的研究結(jié)果：(1)HMGBl的表達(dá)隨HBSS處理時間延長而增加；HBSS處理后核漿分離的Lewis細(xì)胞核中HMGBl減少，而細(xì)胞質(zhì)中HMGBl增
8、加，且在細(xì)胞培養(yǎng)上清中檢測到HMGBl，說明在饑餓狀態(tài)下HMGBl有從核到胞漿的遷移，并最終分泌到細(xì)胞外。(2)饑餓處理后細(xì)胞中自噬標(biāo)志性分子LC3．II及促自噬分子Beclin—l表達(dá)增加，泛素化蛋白p62減少：重組HMGBI(I“g／m1)N激細(xì)胞后，LC3一II的表達(dá)增加。(3)siRNA降低HMGBl表達(dá)或EP抑制HMGBl分泌后，自噬相關(guān)分子LC3表達(dá)減少。(4)在Lewis細(xì)胞中檢測到HMGBl受體RAGE、TLR2、TLR4的表達(dá)
