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《轉(zhuǎn)錄因子cebpβ參與hcmv ul111a基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)論文題目：整顯國王￡堡壘￡照叁皇玨￡巡衛(wèi)墜蘭曼曼鰉國萬方數(shù)據(jù)目錄中文摘要????????????????????????1英文摘要????????????????????????3前言????????????????????????6刖吾????????????????????????6材料與方法???????????????????????8實驗結(jié)果????????????????????????36分析與討論???????????????????????45，J、結(jié)????????????????????????48
2、參考文獻????????????????????????49致{射????????????????????????52綜述及參考文獻?????????????????????53獨創(chuàng)性聲明???????????????????????67萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)科大學碩士學位論文轉(zhuǎn)錄因子c徹Pp參與HCMVULIIIA酆]轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究中文摘要目的；本研究通過檢測HCMV潛伏感染與激活感染THP．1細胞中轉(zhuǎn)錄因子C／EBPB的表達，分析C／EBPD與HCMVULlllA基因啟動子區(qū)的結(jié)合率、ULlllA基因啟動子結(jié)合區(qū)組蛋白修飾和DNA甲
3、基化情況，探討轉(zhuǎn)錄因子C／EBPp參與HCMVULIIIA基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，為進一步研究HCMV感染的分子機制提供實驗依據(jù)。方法：1．建立HCMV潛伏與激活感染THP．1細胞模型HCMVADl69株(MOI----5)感染THP．1細胞，370C、5％C02環(huán)境中培養(yǎng)lOd。熒光定量PCR測定細胞內(nèi)HCMV．DNA拷貝數(shù)；RT-PCR檢測HCMVULl23、UL83和LUNAmRNA的表達，判斷HCMV是否為潛伏感染狀態(tài)。HCMV潛伏感染THP-1細胞后，加入佛波酯(PMA，終濃度為100ng／山)，370C、5％C02環(huán)境中
4、培養(yǎng)lOd。熒光定量PCR方法測定細胞內(nèi)HCMV．DNA的拷貝數(shù)；RT-PCR檢測HCMVULl23、UL83和LUNAmRNA的表達，判斷經(jīng)PMA刺激誘導后HCMV是否為激活感染狀態(tài)。2．轉(zhuǎn)錄因子C／EBP13-與HCMVULlllA基因啟動子區(qū)結(jié)合實驗熒光定量PCR測定HCMV潛伏與激活感染時cmvlL—lO剪接體的轉(zhuǎn)錄表達；染色質(zhì)免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation，CHIP)分析HCMV潛伏與激活感染時C／EBPB與ULI11A基因啟動子區(qū)結(jié)合情況；Westernblot測定HCMV潛伏與
5、激活感染時細胞核內(nèi)C／EBPB的表達。3．HCMVULlllA基因啟動子區(qū)表觀遺傳學修飾實驗采用ChIP技術分析HCMV潛伏與激活感染時ULIllA基因啟動子C／EBPp結(jié)合區(qū)組蛋白與抗組蛋白H3．K9乙?；贵w、二甲基化抗體的結(jié)合情況。采用亞硫酸氫鹽測序法(BisulfiteSequencingPCR，BSP)分析HCMV潛伏與激活感染時ULlllA基因啟動子區(qū)DNA甲基化狀態(tài)。結(jié)果：1．HCMV潛伏與激活感染THP．1細胞模型的建立HCMVADl69株感染THP．1細胞后，細胞內(nèi)HCMV．DNA拷貝數(shù)隨著培養(yǎng)時萬方數(shù)據(jù)溫州醫(yī)
6、科大學碩士學位論文間的增加基本不變。ULl23mRNA在感染后第l天即有表達，第5天達到高峰，隨后逐漸下降直至消失：UL83mRNA在感染過程中未見表達：LUNAmRNA在感染過程中持續(xù)表達，提示HCMV在THP．1細胞中處于潛伏狀態(tài)。PMA刺激誘導HCMV潛伏感染的THP．1細胞分化后，細胞內(nèi)HCMV-DNA拷貝數(shù)隨著培養(yǎng)時間的增加而升高：UL83mRNA在PMA刺激后第5天開始持續(xù)表達。ULl23mRNA、LUNAmRNA在感染過程中均持續(xù)表達，提示經(jīng)PMA刺激誘導后HCMV在分化的THP．1細胞中處于激活狀態(tài)。2．轉(zhuǎn)錄因子
7、C／EBP13-與HCMVULlllA基因啟動子區(qū)結(jié)合分析HCMV潛伏與激活感染TI-IP．1細胞4d后，熒光定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)，cmvIL一10剪接體在HCMV潛伏感染中未轉(zhuǎn)錄表達，而HCMV激活感染中可見轉(zhuǎn)錄表達；ChIP分析顯示，HCMV潛伏感染時轉(zhuǎn)錄因子C／EBPB與ULlllA基因啟動子區(qū)的結(jié)合率較HCMV激活感染低(P<0．05)；Westernblot檢測顯示，HCMV激活感染細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子C／EBPp表達高于潛伏感染。3．HCMVULl11A基因啟動子區(qū)表觀遺傳學修飾結(jié)果ChIP實驗結(jié)果表明，在HCMV潛伏與激
8、活感染過程中，HCMVULl11A基因啟動子C／EBPB結(jié)合區(qū)均未見組蛋白H3．K9乙酰化和甲基化修飾。BSP分析發(fā)現(xiàn)，在HCMV潛伏與激活感染組中均未見C／EBPp結(jié)合位點存在DNA甲基化，而HCMV潛伏感染時ULlllA基因啟動子區(qū)DNA總甲基化率高于激活感
