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《體外培養(yǎng)原代皮質(zhì)神經(jīng)元糖氧剝奪復(fù)糖復(fù)氧模型篩選與亞低溫有聯(lián)合作用的神經(jīng)保護(hù)劑的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、南方醫(yī)科大學(xué)201I級(jí)博士學(xué)位論文體外培養(yǎng)原代皮質(zhì)神經(jīng)元糖氧剝奪／復(fù)糖復(fù)氧模型篩選與亞低溫有聯(lián)合作用的神經(jīng)保護(hù)劑的研究ScreeningSynergisticNeuroprotectiveAge．swithHypothermiaonPrimaryCerebrocorticalNeuronsExposedtoOxygenGlucoseDeprivationandReoxygenation課題來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金(81271521)廣東省科技計(jì)劃(2012A030400011)學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層。次所在學(xué)院答
2、辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)委員高筱雅潘速躍神經(jīng)病學(xué)全日制博士研究生第一臨床學(xué)院陸正奇教授張為西教授李中教授高慶春教授周亮副教授2014年5月1日廣州博士學(xué)位論文體外培養(yǎng)原代皮質(zhì)神經(jīng)元糖氧剝奪／復(fù)糖復(fù)氧模型篩選與亞低溫有聯(lián)合作用的神經(jīng)保護(hù)劑博士研究生：高筱雅指導(dǎo)教師：潘速躍摘要研究背景中國(guó)腦血管病年均發(fā)病率為193．779／10萬(wàn)，死亡率81．441／10萬(wàn)不等，已經(jīng)成為中國(guó)第一位的死因和致殘?jiān)?。缺血性腦血管病——腦梗死占腦血管病的大多數(shù)，其中大面積腦梗死的死亡率可高達(dá)80％，且絕大部分導(dǎo)致嚴(yán)重殘疾。腦血管病的高發(fā)病率、高致死率、高
3、致殘率，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。如何降低大面積腦梗死的致殘率和致死率是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞的損害是一系列缺血級(jí)聯(lián)效應(yīng)的后果，包括線粒體功能紊亂、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、高鈉和低K十、ROS和NO生成增加、興奮性氨基酸毒性、炎性因子及粘附分子釋放增加、微血管阻塞、血腦屏障破壞、Caspase蛋白家族的級(jí)聯(lián)激活等。在梗死后幾分鐘到幾天，不同的病理過(guò)程在時(shí)間上互相重疊并起到推波助瀾的作用。腦梗死病變區(qū)按缺血的程度可分為缺血核心區(qū)和缺血半暗帶區(qū)。核心區(qū)內(nèi)細(xì)胞因完全缺血、過(guò)度激活的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)／受體的毒性等致使細(xì)胞在幾分鐘內(nèi)
4、死亡。缺血半暗帶區(qū)的細(xì)胞因缺血后周邊側(cè)枝循環(huán)的再灌注，還有存活的可能。由于再灌注時(shí)間窗只有4．5h，許多患者就診時(shí)核心區(qū)的細(xì)胞己不可逆死亡，因此靶向干預(yù)缺血半暗帶區(qū)是目前實(shí)驗(yàn)研究和臨床治療的主要目標(biāo)。在腦保護(hù)治療中，治療性低溫是目前被臨床證明有效的腦保護(hù)措施之一。中文摘要亞低溫通常指28～35℃，而臨床廣泛應(yīng)用的是33．34℃。亞低溫在顱腦外傷、心肺復(fù)蘇后缺血缺氧性腦病和新生兒窒息的治療中都取得了卓著的成績(jī)。但是，亞低溫在腦梗死治療方面的應(yīng)用近年才剛剛起步，實(shí)驗(yàn)室及臨床的證據(jù)尚不充足。我們前期的研究表明，亞低溫可以縮小MCAO大
5、鼠的梗死灶面積，但是神經(jīng)功能評(píng)分并沒(méi)有隨之改善，因此需要進(jìn)一步采取措施提高療效。此外，亞低溫治療也有許多副作用，如寒戰(zhàn)，過(guò)度鎮(zhèn)靜抑制呼吸功能，以及長(zhǎng)時(shí)間亞低溫使肺部感染、下肢深靜脈血栓等并發(fā)癥發(fā)生率增加等等。因此，有必要聯(lián)合應(yīng)用有協(xié)同作用的藥物，以進(jìn)一步改善亞低溫治療的效果，改善腦梗死的預(yù)后。目前有報(bào)道在體外或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中具有神經(jīng)保護(hù)作用的藥物很多，從其作用機(jī)制來(lái)看，包括谷氨酸受體阻滯劑、^r．氨基丁酸受體激動(dòng)劑、鈣離子拮抗劑、自由基清除劑、抗生素和免疫抑制劑、生長(zhǎng)因子類、5．羥色胺受體激動(dòng)劑、膜成分及其穩(wěn)定劑、腦代謝劑、神經(jīng)肽類
6、、抗糖尿病藥物、激素類、中成藥及各種新藥等。但是，這些藥物在臨床轉(zhuǎn)化方面均遇到了障礙。究其原因，除了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)缺陷、種族差異、藥物療效不夠顯著、臨床應(yīng)用時(shí)機(jī)大多晚于實(shí)驗(yàn)研究、副作用過(guò)大等之外，還因?yàn)槟X梗死后的損害涉及到多個(gè)相互關(guān)聯(lián)、互相重疊的病理機(jī)制，而一種藥物僅僅作用于缺血級(jí)聯(lián)的一個(gè)或某幾個(gè)環(huán)節(jié)，作用靶點(diǎn)過(guò)于單一，不能對(duì)缺血級(jí)聯(lián)產(chǎn)生有效應(yīng)的結(jié)果?；谀X梗死病理機(jī)制的復(fù)雜性和多樣性，聯(lián)用多種有協(xié)同作用的藥物或治療方法有可能取得突破性的效果，如聯(lián)合非藥物性神經(jīng)保護(hù)手段——治療性低溫。在亞低溫與神經(jīng)保護(hù)劑聯(lián)合應(yīng)用方面國(guó)內(nèi)外均有所涉
7、獵。國(guó)內(nèi)外和我們前期的研究都證實(shí)，某些藥物如硫酸鎂、腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子等，在與亞低溫聯(lián)用治療實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦梗死時(shí)表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。但是，目前國(guó)內(nèi)外尚未有研究對(duì)現(xiàn)有的神經(jīng)保護(hù)劑與亞低溫聯(lián)用的療效進(jìn)行過(guò)系統(tǒng)的篩選。我們根據(jù)神經(jīng)保護(hù)劑的作用機(jī)制、可獲得性、毒性、易用性等特點(diǎn)選取了26種神經(jīng)保護(hù)劑納入研究。與動(dòng)物模型和人體實(shí)驗(yàn)相比，體外糖氧剝奪／復(fù)糖復(fù)氧(OGD／R)模型可在體外模擬不同程度的缺血／再灌注狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)條件更一Ⅱ博士學(xué)位論文致，并能進(jìn)行高通量的單藥或復(fù)合藥物篩選，耗時(shí)耗資少，具有動(dòng)物模型及人體實(shí)驗(yàn)不可比擬的優(yōu)越性：而神經(jīng)元細(xì)胞是腦
8、組織中的主要細(xì)胞，其預(yù)后決定了腦組織的總體預(yù)后，因此我們首先建立了原代皮質(zhì)神經(jīng)元的重度OGD／R模型，然后利用這一模型對(duì)26個(gè)神經(jīng)保護(hù)劑與亞低溫的聯(lián)合作用進(jìn)行了篩選。我們選取了細(xì)胞活力和凋亡率作為藥物篩選的兩個(gè)主要指標(biāo)，前者反映活細(xì)胞數(shù)目的多少，后者反映細(xì)胞受損
