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《萊菔硫烷對原代培養(yǎng)神經(jīng)元氧糖剝奪復(fù)氧損傷的保護作用及機制研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文萊菔硫烷對原代培養(yǎng)神經(jīng)元氧糖剝奪/復(fù)氧損傷的保護作用及機制研究姓名：吳雪梅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：趙涌201205重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文萊菔硫烷對原代培養(yǎng)神經(jīng)元氧糖剝奪／復(fù)氧損傷的保護作用及機制研究摘要目的：探討萊菔硫烷(SFN)對氧糖剝奪(OGD)／復(fù)氧(R)損傷的皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡的影響并探討其與P13K／AKT通路的關(guān)系。方法：(1)新生1d的SD乳大鼠，皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)5-6d后，細(xì)胞被隨機分為正常對照組、OGD組、SFN組，SFN+LY組及LY組，建立皮質(zhì)神經(jīng)元的OGD模型。(2)1h后復(fù)氧，
2、模擬再灌注模型，OGD／R期間給予O．1、0．2、O．5、l、2．5、5pmol／LSFN，P13K抑制劑LY294002(10pmol／L)在OGD／R期間與SFN或不與SFN同時加入神經(jīng)元。(3)復(fù)氧24h后，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測定神經(jīng)元的存活率，Hoechst33258／PI聯(lián)合染色法測定細(xì)胞損傷程度，免疫熒光和Westernblot觀察神經(jīng)元OGD瓜后Bcl一2、cleavedcaspase-3、Akt和p-Akt的表達。結(jié)果：(1)MTT結(jié)果顯示在SFN處理濃度在1}tmol／L時，可顯著增加神國家自然科學(xué)基合咨助(No．30900457
3、和No．81070917)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文經(jīng)元的細(xì)胞存活率。(2、)Hoechst33258／PI聯(lián)合染色結(jié)果顯示SFN可顯著減少神經(jīng)元的損傷。(3)免疫熒光和Westernblot結(jié)果顯示SFN增加Bcl一2和p-Akt的表達，減少cleavedcaspase．3的表達。而LY294002抑制p-Akt的表達，減少Bcl．2的表達，增加cleavedcaspase-3的表達。結(jié)論：SFN可減輕OGD／R引起的皮質(zhì)神經(jīng)元的凋亡損傷，這可能與激活P13K／AKT抗凋亡通路有關(guān)。關(guān)鍵詞：萊菔硫烷；氧糖剝奪；凋亡；神經(jīng)保護SULFORAPAHNEPRO
4、TECTSNEURONSAGAINSTINJURYCAUSEDBYOXYGEN—GLUCOSEDEPRIVATION／REOXYGENATIONANDITSMECHANISMABSTRACTObjective：ToinvestigatewhetherSFNprotectsneuronsagainstinjurycausedbyOxygen-GlucoseDeprivation(OGD)／Reoxygenation(R)andthepossiblemechanismsinvolvedinneuroprotection．Methods：(1)Primaryneur
5、onalculturesofcerebralcortexwereobtainedfrom1．day．oldSprague-Dawleyratsonday5-6invitro·(2)ThecorticalneuronswereexposedtoOGDforlh，foUowedbyreo珂genationfor24handweretreatedwith0．1，0．2，0．5，1，2．5，5¨mo兒SFN．for25hduringOGD／R．AP13Kspecificinhibitor(LY294002)(10}lmol／L)wasaddedtocorticalne
6、uronswithorwithoutSFNfor25hd證ngOGD／R．Thecellswererandomlydividedintocontrolgroup，OGDgroup，SFNgroup，SFN+LYgroupandLYgroup·(3)Atter24hreoxygenation，MTTwasusedtoquantifycellviabilityassay；cellinjurywasmeasuredbyHoechst33258／propidium-iodide(PI)重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文staining；immunofluorescence
7、stainingandwesternblotwereusedtodetectexpressiononmoleculareventsrelatedtoapoptosis．Resuits：(1)MTTassayshowedthat1}tmol／LSFNsignificantlyincreasedcellviability；(2)While，Hoechst33258／PIstainingshowedthatinjuredneuronswasreducedsignificantlyintheSFNgroup．(3)Furthermore，immunofluoresce
8、ncestainingandweste
