microrna在骨髓間質(zhì)干細(xì)胞介導(dǎo)的急性腎損傷修復(fù)中的作用研究

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1、碩士學(xué)位論文microRNA在骨髓間質(zhì)干細(xì)胞介導(dǎo)的急性腎損傷修復(fù)中的作用研究THEROLEOFMICRoRNAINBoNEMARROWMESENCHYMALSTEMCELL—MEDL～TEDREPAIRoFACUTEKIDNEYINJURY作者姓名：周穎指導(dǎo)教師：錢暉教授小組成員：申請(qǐng)學(xué)位：學(xué)科專業(yè)：許文榮教授朱偉研究員碩士臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文提交日期：2013年5月3日論文答辯日期：2013年6月10日學(xué)位授予單位：江蘇大學(xué)學(xué)位授予日期：2013年6月17日答辯委員會(huì)主席：張竹繁教授基金資助：國(guó)家自然科

2、學(xué)基金重大研究計(jì)劃(91129718)國(guó)家自然科學(xué)基金(81272481，31140063，81071421)江蘇省醫(yī)學(xué)領(lǐng)軍人才與創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(LJ201117)獨(dú)創(chuàng)性聲明＼I㈣必劌炒本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果

3、由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：J司敖日期：測(cè)j年6月／7日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學(xué)、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所、國(guó)家圖書館、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本論文編入《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》并向社會(huì)提供查詢，授權(quán)中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社將本論文編入《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》并向社會(huì)提供查詢。論文的公布

4、(包括刊登)授權(quán)江蘇大學(xué)研究生院辦理。本學(xué)位論文屬于不保密學(xué)位論文作者簽名：J司疑洲)年‘月，7日指導(dǎo)教師簽名：川年‘月，-lEl江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的探討大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(bonemallrowmesenchymalstemcells，rMSCs)在順鉑誘導(dǎo)的大鼠急性腎損傷(acutekidneyinjury，AKI)中通過(guò)調(diào)控關(guān)鍵microRNA(miRNA)的表達(dá)從而發(fā)揮修復(fù)作用。骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(rMSCs)移植AKI大鼠，觀察rMSCs對(duì)損傷腎的修復(fù)作用；miRNA芯片比較篩選出在rMS

5、Cs組與PBS組中表達(dá)差異的miRNAs分子，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證并探尋rMSCs修復(fù)腎損傷中的關(guān)鍵miRNAs，揭示rMSCs修復(fù)腎損傷的可能分子機(jī)制。方法以6mg／kg劑量的順鉑經(jīng)腹腔注射到大鼠體內(nèi)，建立急性腎損傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。于順鉑注射后的24h以尾靜脈注射方式將2×106rMSCs輸注到大鼠體內(nèi)，并分別在損傷不同時(shí)間點(diǎn)收集大鼠的血液，檢測(cè)血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平來(lái)評(píng)價(jià)MSC對(duì)腎功能的改善情況，通過(guò)活體成像觀察rMSCs的組織定位。于順鉑注射后5d處死大鼠，留取腎組織標(biāo)本，HE染色觀察rMS

6、Cs對(duì)腎組織的修復(fù)作用，WesternBlot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，TUNEL染色檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞的凋亡情況，綜合評(píng)價(jià)間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)急性腎損傷的修復(fù)作用。在此基礎(chǔ)上，留取正常大鼠(對(duì)照組)，急性腎損傷輸注PBS大鼠(PBS組)以及輸注rMSCs的大鼠(rMSCs組)的腎組織進(jìn)行microRNA芯片分析。經(jīng)芯片比較篩選，選取rMSCs組與PBS組差異顯著的miRNAs分子，經(jīng)qRT．PCR檢測(cè)并驗(yàn)證這些miRNAs分子在體內(nèi)外模型中的表達(dá)情micro

7、RNA在骨髓間質(zhì)干細(xì)胞介導(dǎo)的急性腎損傷修復(fù)中的作用研究況。在體內(nèi)外模型中差異變化一致的miRNAs，進(jìn)一步研究其下游靶基因及相關(guān)信號(hào)通路，探討rMSCs修復(fù)腎損傷中可能的分子機(jī)制。結(jié)果體內(nèi)活體成像結(jié)果顯示經(jīng)尾靜脈注射的rMSCs能夠到達(dá)損傷的大鼠腎組織，rMSCs移植組的BUN、Cr水平較PBS組有明顯的下降(P

8、的凋亡，WesternBlot顯示rMSCs移植組的Bax表達(dá)下調(diào)，Bcl．2的表達(dá)上調(diào)。microRNA芯片分析顯示部分miRNAs分子在PBS組較正常對(duì)照組的表達(dá)顯著增高或降低，而rMSCs可以逆轉(zhuǎn)相應(yīng)miRNAs分子的表達(dá)。選取miR一92b，miR一146b，miR．150*與miR一455進(jìn)行驗(yàn)證，qRT—PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示miR．146b在體內(nèi)外模型中變化一致且與芯片結(jié)果相符，初步選取miR．146b進(jìn)行體外功能實(shí)驗(yàn)。Weste