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《瘋草內(nèi)生真菌——undifilum oxytropis合成苦馬豆素的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得寧夏大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名：積勞礱時(shí)間：>bl≮年5月≥8日關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人完全了解寧夏大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閡，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)
2、位論文。同意寧夏大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)研究生簽名：孤奄奄時(shí)間：2。lq年多月迎圈黜名：彳啦磚時(shí)間?竹對(duì)月諺日本研究由國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31201962)提供資助TheworkissupportedbygrantformportedgrantIormlneNationalNaturalScienceFoundationofChina(31201962)苦馬豆素甘油醛．3．磷酸脫氫酶內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)線粒體核糖體小亞基棘豆彎曲芽管蠕孢菌a．甘露糖苷酶硝基苯基．
3、o．D．甘露糖苷改良基礎(chǔ)鹽聚乙二醇中英文縮寫對(duì)照swainsonine，SWglyceraldehyde·3-phosphatedehydrogenase，gpdinternaltranscribedspace，ITSmitochondrialsmallsubunit，mtSSUUndifilumoxytropis，U．oxytropisa-mannosidasefi'omjaekbean4-nitrophenyl-a-D--mannopyranosidesubslrateMurashigeandskoogmajorsaltspolye
4、thyleneglycol，PEG摘要瘋草是豆科棘豆屬和黃芪屬含有苦馬豆素的有毒植物的統(tǒng)稱，其主要毒性成分為苦馬豆素(swainsonine，SW)，它是導(dǎo)致動(dòng)物瘋草中毒的根本原因。近年研究表明，瘋草內(nèi)普遍存在能產(chǎn)生SW的內(nèi)生真菌——彎曲牙管蠕孢菌(Undifilumspp)，該類內(nèi)生真菌是瘋草中SW產(chǎn)生的主要因素，抑制或阻斷內(nèi)生真菌合成SW，將有望降低或消除瘋草的毒性。目前，瘋草內(nèi)生真菌中的SW合成途徑仍不清楚，研究各種因素對(duì)SW合成的影響可為進(jìn)一步闡釋瘋草內(nèi)生真菌中SW的生物合成途徑和分子調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。本文主要對(duì)瘋草中產(chǎn)SW內(nèi)生
5、真菌進(jìn)行分離與鑒定，并研究不同因素對(duì)瘋草內(nèi)生真菌合成SW的影響，產(chǎn)SW內(nèi)生真菌原生質(zhì)體制備及再生，為進(jìn)一步闡釋瘋草內(nèi)生真菌中SW的生物合成途徑、分子調(diào)控機(jī)制及瘋草內(nèi)生真菌突變菌株的選育奠定基礎(chǔ)。1．從寧夏黃花棘豆中共分離到5株真菌，其中菌株NX．FEL001菌絲中含有苦馬豆素，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)，該菌株能夠產(chǎn)生分生孢子及分生孢子梗等結(jié)構(gòu)，序列同源性和系統(tǒng)發(fā)育分析表明該菌株與Undifilumoxytropis真菌的親緣關(guān)系最近，根據(jù)形態(tài)結(jié)構(gòu)和分子進(jìn)化分析結(jié)果將菌株r,rx．FEL001鑒定為Uoxytropis。2．研究不同pH、聚Z,---醇
6、(polyethyleneglycol，PEG)、L．哌可酸、L．賴氨酸、Q-酮戊二酸對(duì)Uoxytropis的生長(zhǎng)和SW合成的影響。結(jié)果表明，當(dāng)pH在4．5～6．s2．間時(shí)，pH對(duì)Uoxytropis的生長(zhǎng)無(wú)顯著影響，但在該范圍內(nèi)，較低的pH可抑制真菌SW的合成；PEG可促進(jìn)Uoxytropis生長(zhǎng)，但會(huì)抑制真菌SW的合成；L．哌可酸可顯著促進(jìn)U．oxytropis的生長(zhǎng)，當(dāng)其在培養(yǎng)基中的初始濃度為10。3mol／L和10五mol／L時(shí)，真菌中SW的合成受到抑制，當(dāng)其濃度為10。4mol／L時(shí)，真菌中SW的合成顯著增加：當(dāng)培養(yǎng)基中L．賴
7、氨酸的初始濃度為10‘3mol／L時(shí)，U呸炒印西中SW的合成顯著增加，而當(dāng)，L．賴氨酸的初始濃度為10～mol／L、10。2mol／L或10。4mol／L時(shí)，真菌的SW合成受到顯著抑制。當(dāng)培養(yǎng)基中a．酮戊二酸的初始濃度分別為10～mol／L、10之mol／L、10。3mol／L時(shí)，Uoxytropis生長(zhǎng)及SW合成的受到抑制；以上研究結(jié)果表明，L．哌可酸、L．賴氨酸、a．酮戊二酸可能是U．oxytropis合成SW的前體物質(zhì)。3．懸菌液涂布于固體培養(yǎng)基上22℃培養(yǎng)15d，以1mol／L山梨醇配制1％纖維素酶+1％蝸牛酶+0．1％溶壁酶組
8、成的復(fù)合酶系，在菌絲與酶解液質(zhì)量體積比為1：10，酶解溫度為35℃，80r／min振蕩酶解3h時(shí)的條件下，U．oxytropis原生質(zhì)體的生成量最大。純化后的原生質(zhì)體在1mo兒山梨醇配制的YCM再生培養(yǎng)基上
