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《普魯蘭酶產(chǎn)生菌的篩選及其酶學(xué)性質(zhì)的研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號UDC密級編號碩士學(xué)位論文普魯蘭酶產(chǎn)生菌的篩選及其酶學(xué)性質(zhì)的研究ScreeningofPullulanase-ProducingStrainandStudyontheEnzymaticCharacteristics學(xué)位申請人：王延凱指導(dǎo)教師：李市場副教授一級學(xué)科：生物學(xué)二級學(xué)科：微生物學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士2016年05月萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也
2、不包含為獲得河南科技大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的其他學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：日期：關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解河南科技大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校擁有對所有學(xué)位論文的復(fù)制權(quán)、傳播權(quán)、匯編權(quán)及其它使用權(quán)（特殊情況需要保密的論文應(yīng)提前說明，但在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定）。需要保密的論文請?zhí)顚懀罕緦W(xué)位論文在年月至年月期間需要保密，解密后適用本授權(quán)書。（需要保密的學(xué)位論文無須向圖書館提供論文的電子文檔）研究生簽名
3、：導(dǎo)師簽名：日期：萬方數(shù)據(jù)摘要摘要淀粉是由葡萄糖構(gòu)成的高聚體，是植物體存儲的營養(yǎng)成分，分為直鏈淀粉和支鏈淀粉。淀粉是食品加工及發(fā)酵行業(yè)中最為頻繁使用的原材料，但是由于淀粉中含有大量的支鏈淀粉，這會影響到淀粉的使用效率。而普魯蘭酶是一種能夠?qū)Ｒ恍詳嚅_支鏈淀粉分支點(diǎn)中α-l，6糖苷鍵的脫支酶，可以斷裂下整個側(cè)枝，生成直鏈淀粉，提高支鏈淀粉的利用效率。由于普魯蘭酶主要是國外進(jìn)口，成本較高，為了降低成本，國內(nèi)關(guān)于普魯蘭酶的研究逐漸成為了熱點(diǎn)。本研究所用的菌株是從河南仰韶生化工程有限公司提供的發(fā)酵液中分離出一株普
4、魯蘭酶酶活較高的菌株（GX-6），經(jīng)形態(tài)觀察、生理生化鑒定初步鑒定為枯草芽孢桿菌。利用紫外線（15W，30cm）、硫酸二乙酯（DES）、微波誘變（800W,2800MHZ）三種誘變方法對菌種進(jìn)行誘變選育。確定紫外誘變時間為60s，DES誘變時間為8min，微波誘變時間為10s。使用三種誘變方法進(jìn)行復(fù)合誘變。反復(fù)誘變后，通過初篩和復(fù)篩篩選出一株產(chǎn)酶較高，遺傳性能較好的菌株（GX-6-1）。該菌株酶活達(dá)到1.57U/mL，比初始菌株高23.57%。以該菌株（GX-6-1）為出發(fā)菌株，進(jìn)行產(chǎn)普魯蘭酶培養(yǎng)基及培
5、養(yǎng)條件的優(yōu)化。得到普魯蘭酶高產(chǎn)菌株后，對其產(chǎn)酶培養(yǎng)基及培養(yǎng)工藝進(jìn)行研究。通過單因素實(shí)驗(yàn)來研究對影響普魯蘭酶產(chǎn)量的主要因素，結(jié)果表明，當(dāng)玉米淀粉3.5%、葡萄糖0.4%、玉米漿2.5%、FeSO40.1%、接種量6%、培養(yǎng)溫度37℃、初始pH6.5時，產(chǎn)酶量最高。利用Plackett-Burmen試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以P<0.05為準(zhǔn)，篩選出玉米淀粉，玉米漿，初始pH三個對普魯蘭酶產(chǎn)量有顯著影響因素。利用響應(yīng)面分析這三個因素交互作用對得到普魯蘭酶酶活的影響。最后得到優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基是:玉米淀粉濃度3.49%，葡萄
6、糖0.4%，玉米漿濃度2.48%，K2HPO40.1%,MgSO4.7H2O0.05%，F(xiàn)eSO40.1%，初始pH值為6.7，培養(yǎng)溫度37℃，初始接種量為6%，酶活達(dá)到11.66U/mL。此外，本文還研究10L發(fā)酵罐的工藝參數(shù)，確定DE值為10，通氣量1:1.0，發(fā)酵22h，酶活達(dá)到19.3U/mL。最后對普魯蘭酶粗酶性質(zhì)進(jìn)行研究。發(fā)現(xiàn)普魯蘭酶的酶反應(yīng)的最適溫度為70℃，最適反應(yīng)pH值為6.5；通過對酶穩(wěn)定性的研究發(fā)現(xiàn)：在pH為5.5~6.5，2+2+溫度為50℃以下都較穩(wěn)定。金屬離子中Fe，Mg對普
7、魯蘭酶活性有激活作用；2+2+2+Cu,Mn,Ba對普魯蘭酶有較強(qiáng)的抑制作用。關(guān)鍵詞：普魯蘭酶；菌種篩選；誘變；發(fā)酵條件；酶學(xué)性質(zhì)I萬方數(shù)據(jù)摘要論文類型：應(yīng)用基礎(chǔ)研究選題來源：企業(yè)委托II萬方數(shù)據(jù)ABSTRACTABSTRACTStarchisformedbyhighglucosepolymers,whichiscomposedofamyloseandamylopectin,anditisstoredinplantnutrients.Atthesametime,itisusedasrawmaterial
8、sinthefoodandfermentationindustry.However,Industrialstarchcontainsalargenumberofamylopectin.Buttheamylopectincannotbecompletelydecomposed,itaffectedtheutilizationefficiencyofstarch.Pullulanaseisadebranchingenzyme,anditcanh
