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《普魯蘭酶性質(zhì)的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、一如何獲得目的菌株(1)普魯蘭酶產(chǎn)生菌的初篩。収log土樣加入到裝有90汕無(wú)菌水和玻璃珠的三角瓶屮，振蕩30min,使樣品充分打散后，吸取1.OmL于富集培養(yǎng)基中，在35°C下振蕩培養(yǎng)48h。取培養(yǎng)液稀釋涂布于以普魯蘭糖為唯一碳源的平板分離培養(yǎng)基上，35°C溫箱中培養(yǎng)48h。將平板倒置，注入10mL無(wú)水乙醇，室溫放置24h,觀察菌落并挑出周圍出現(xiàn)透明圈的菌落，于斜而培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。(2)菌種純化。用接種壞從斜面培養(yǎng)基上挑取少量菌株接入平板固體培養(yǎng)基，采用平板劃線分離法對(duì)菌株進(jìn)行純化，將產(chǎn)生透明圈的單菌落接入斜面培養(yǎng)基，供菌種復(fù)篩用。(3)搖瓶培養(yǎng)法復(fù)篩。將斜面保存的菌種接入種子培養(yǎng)基中，35
2、°C振蕩培養(yǎng)24h后，制得菌懸液，將菌懸液以4%接種量接入菌種篩選搖瓶培養(yǎng)基，35°C振蕩培養(yǎng)48h后，測(cè)定發(fā)酵液中普魯蘭酶活力。二目的產(chǎn)物的檢測(cè)方法三目的菌產(chǎn)酶條件的優(yōu)化純酶的獲得以及酶學(xué)性質(zhì)研究方案酶的初步純化ItO蘭Promozyme100mL（NovoNordisk公詞）I透析脫鹽后?離心（8000r/min.15min）II；上清液沉淀（棄去）?以1mol/LHCL調(diào)pH至4.5-5.04力D（NH4）29C）4達(dá)25%飽和度42?4V24h后.離心（8000r/min,15r/min）4II上清液沉淀（棄去）4加（NKbSCX達(dá)25%飽和度I2-4t!!>?24h后.離心（8000
3、r/min.15min）44I上清液（棄去〉沉淀4以PH5.0.0.02mol/L??緩沖液溶解?對(duì)pH5?0?0?02mol/LW酸緩沖液透析48h4透析蔽（粗酶液）冷凍干?J9fflB?*2.45g酶的部分純化取1g上述粗酶蛋白洛于卩115?0.0.()2mol/L的醋酸緩沖液?上預(yù)先平衡好的I)F：E-纖維素(DEAF?52)柱.用PII5.0.()?()2m(>l/L醋酸緩沖液洗脫?分部收集.每管1()ink.測(cè)定每管收集液的酶活。將具最大活性峰的收集液合并?冷凍濃縮后?上預(yù)先平衡好的SrphM林OKX)凝膠柱(2.0x7()nn).用PII5.0.0.()2屮1/1?的醋酸緩沖液洗
4、脫?分部收集?每管5mL.測(cè)定徒管收集液的酶活?將呈現(xiàn)酶活的洗脫峰合并?冷凍干燥后?得1.2mg酶蛋白。普魯蘭酶的部分酶學(xué)性質(zhì)。(1)最適溫度及熱穩(wěn)定性。將普魯蘭酶液分別于不同溫度下測(cè)其活力，以活力最高者為100%對(duì)照，測(cè)試其最適反應(yīng)溫度。在不同溫度下，將普魯蘭酶液分別保溫lh后，測(cè)定殘余酶活力，以活力最高者為100%對(duì)照，試驗(yàn)溫度對(duì)普魯蘭酶穩(wěn)定性的影響。(2)最適pH值及pH值穩(wěn)定性。將普魯蘭酶液分別于不同pH值下測(cè)其活力，以活力最高者為100%對(duì)照，測(cè)試其最適反應(yīng)pH值。將普魯蘭酶液在不同pH值緩沖液中于室溫保持24h后，測(cè)定殘余酶活力，以活力最高者為100%對(duì)照，試驗(yàn)pH值對(duì)普魯蘭酶穩(wěn)定
5、性的影響。(3)金屬離子對(duì)普魯蘭酶活性的影響。將不同的無(wú)機(jī)鹽溶液與等量普魯蘭酶液混合，并使混合液屮的無(wú)機(jī)鹽最終濃度達(dá)到0.5mmoL/L,按1.2.3的方法測(cè)定酶活力，設(shè)不加金屬離子組為對(duì)照組，測(cè)定金屬離子對(duì)普魯蘭酶活力的影響。定化》五對(duì)該酶的改性方案(基因工程手段，酶分子修飾,基因工程手段BaciUusnaganoensix(ATCC53909)構(gòu)建胖魯蘭酹基因的表達(dá)我體酣毎的轉(zhuǎn)化■島左達(dá)轉(zhuǎn)化子的捕選工程角實(shí)驗(yàn)室發(fā)毎條件的優(yōu)化的的學(xué)及苗應(yīng)用性質(zhì)的研究六酶的產(chǎn)業(yè)化《酶反應(yīng)器，產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中需要注意的問(wèn)題〉
