陽(yáng)春砂多糖的提取、純化及生物活性研究

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1、廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是個(gè)人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中己經(jīng)特別加以注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明并致謝。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽El期t≯葉年越占月lEl關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權(quán)廣州中醫(yī)藥大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部

2、分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存和匯編本學(xué)位論文。(保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定)論文作者簽名壅?qǐng)?jiān)壘日論文導(dǎo)師簽名站準(zhǔn)論文導(dǎo)師簽名乏豸出月}期：糾’f年ZJEl

3、曰摘要目的：陽(yáng)春砂為姜科植物陽(yáng)春砂AmomumvillosumLour．的干燥成熟果實(shí)，具有化濕和胃、溫脾止瀉、理氣安胎等功效。然而目前關(guān)于陽(yáng)春砂多糖(ASP)的研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)系統(tǒng)化研究陽(yáng)春砂多糖超聲波輔提取工藝，對(duì)陽(yáng)春砂多糖進(jìn)行分離、純化，進(jìn)而對(duì)純化組分進(jìn)行初步藥理試驗(yàn)研究，為開發(fā)出理想的陽(yáng)春砂多糖藥品及相應(yīng)產(chǎn)品提供理論依據(jù)。方法：首先采用響應(yīng)面法(Resp

4、onseSurfaceMethodology，RSM)優(yōu)化超聲波輔助提取陽(yáng)春砂多糖工藝，對(duì)超聲輔助提取時(shí)間、超聲提取溫度、水料比、超聲提取次數(shù)等四個(gè)實(shí)驗(yàn)因素進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)考察，在單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行3因素3水平的Box．BehnkenDesign(BBD)設(shè)計(jì)，然后按照響應(yīng)面設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)操作，根據(jù)設(shè)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算二次線性擬合方程，預(yù)測(cè)最佳提取條件，最后驗(yàn)證理論數(shù)學(xué)模型是否符合實(shí)際實(shí)驗(yàn)；而后在最優(yōu)提取條件下提取陽(yáng)春砂粗多糖，將所得粗多糖采用DEAE．纖維素．52層析柱按極性進(jìn)行梯度洗脫，將不同時(shí)間所分離出的洗脫液分別收集合并濃縮干燥，再將初步純化的粗多

5、糖采用SephadexG．100層析柱進(jìn)一步純化，分別收集即得到極性一致、分子量大小較為均一的純化多糖；將分離所得純化多糖與粗多糖進(jìn)行體外抗氧化試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)對(duì)其清除·02一、·OH一及·DPPIT活性進(jìn)行考察，以評(píng)價(jià)其抗氧化活性；最后用環(huán)磷酰胺(CTX)誘導(dǎo)免疫能力低下小鼠模型，考察ASP對(duì)免疫低下小鼠的免疫器官重量、巨噬細(xì)胞吞噬功能、脾溶血素生成的影響，以評(píng)價(jià)陽(yáng)春砂多糖的免疫調(diào)節(jié)活性。成果：1．提取ASP最佳的提取條件為超聲提取溫度78℃、超聲提取時(shí)間71min、水料比39(v：m，mL·gJ)，提取2次，在該條件下多糖提取率的預(yù)測(cè)值為13．22％，驗(yàn)證值為

6、13．04+0．36％(n=3)，理論值與實(shí)際值吻合。2．ASP經(jīng)分離、純化后得到3個(gè)不同純化組分(ASP．1、ASP．2及ASP．3)，ASP、ASP．1、ASP一2及ASP．3均具有良好的清除·02一、·OH一及·DPPH-活性，ASP．3比粗ASP、ASP．1及ASP．2具有更強(qiáng)的體外抗氧化活性。ASP及其純化組分對(duì)超氧陰離子自由基清除活性要顯著優(yōu)于維生素C。3．ASP能在一定程度上提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的廓清能力及吞噬速度，增加血清中溶血素的含量，增加胸腺和脾臟指數(shù)，提高小鼠機(jī)體免疫能力。結(jié)論：上述研究表明，RSM優(yōu)化超聲波輔助提取ASP工藝參數(shù)穩(wěn)定、

7、可靠；ASP及其純化組分具有良好的抗氧化效果；ASP具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用，可提高機(jī)體免疫能力。說(shuō)明ASP具有良好的生物活性，可用于進(jìn)一步研究，開發(fā)出相應(yīng)藥品及功能保健品，為陽(yáng)春砂的發(fā)展提供新的平臺(tái)。關(guān)鍵詞：陽(yáng)春砂多糖；提??；分離純化；抗氧化；免疫調(diào)節(jié)Extraction，purificationandbi0IogicaIactiVitjesofpoIysaccharidesfromAmomumvi／／osumLour．SpeciaIty：ChineseMediCiBeAuthor：LiShijieTutor：ZhangDanyanAbstractObjec

8、tive：FructusAmoralthedriedandripefruitofAmomumv／／losumLourfromZingiberaceae．Itisoftenusedtoeliminatedampandimproveappetite，towarmthespleenandcheckdiarrhea．ButtherewaslittleresearchontheASPcurrently．FructusAmomiasatraditionalChineseherbalmedicinetreatmentforgastrointestinaldisorders

9、，whichpolysaccharidehasstr