紫蛇尾(ophiopholis+mirabilis)多糖的提取、純化及生物活性研究

紫蛇尾(ophiopholis+mirabilis)多糖的提取、純化及生物活性研究

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1、煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)號(hào):200907304004分類(lèi)號(hào):P735碩士學(xué)位論文紫蛇尾(Ophiopholismirabilis)多糖的提取、純化及生物活性研究研究生姓名:張慧指導(dǎo)教師:郭承華學(xué)科門(mén)類(lèi):理學(xué)專(zhuān)業(yè)名稱(chēng):海洋生物學(xué)論文提交日期:2012年4月2日煙臺(tái)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明和使用授權(quán)說(shuō)明II煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學(xué)位論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下,獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外,本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品或成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體,均已在文中以明確方式標(biāo)

2、明。本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名:日期:年月日學(xué)位論文使用授權(quán)說(shuō)明本人完全了解煙臺(tái)大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本;學(xué)校有權(quán)保存學(xué)位論文的印刷本和電子版,并提供目錄檢索與閱覽服務(wù);學(xué)校可以采用影印、縮印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文;在非保密的論文范圍內(nèi),學(xué)??梢怨颊撐牡牟糠只蛉?jī)?nèi)容。(保密論文在解密后遵守此規(guī)定)論文作者簽名:導(dǎo)師簽名:日期:年月日III煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要本論文以黃渤海交界處長(zhǎng)島海域的紫蛇尾作為實(shí)驗(yàn)材料,采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化了紫蛇尾多糖的提取工藝,測(cè)定了紫蛇尾粗多

3、糖的脫蛋白工藝,并對(duì)紫蛇尾多糖理化性質(zhì)進(jìn)行了測(cè)定,研究了紫蛇尾多糖的分離純化,以及紫蛇尾粗多糖的部分生物活性,包括:抑菌活性,抗氧化活性以及對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用,為紫蛇尾資源的開(kāi)發(fā)利用提供必要的理論依據(jù)。4采用L9(3)正交實(shí)驗(yàn)法,以多糖產(chǎn)率為指標(biāo),研究提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)4個(gè)因素對(duì)提取工藝的影響。以正交實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為條件建立多元線性模型,結(jié)果表明:對(duì)紫蛇尾多糖得率影響最大的因素是溫度,其次是提取次數(shù)、提取時(shí)間和料水質(zhì)量比。本實(shí)驗(yàn)得出的最佳提取工藝條件為:料水質(zhì)量比1∶20,溫度70℃,提取時(shí)間4h,提取次數(shù)4次。結(jié)果可信,說(shuō)明紫蛇尾多

4、糖的產(chǎn)率和提取工藝相關(guān)因素有顯著的相關(guān)關(guān)系。采用實(shí)驗(yàn)中常用的Sevag法,酶法,以及酶-Sevag法聯(lián)用三種方法,進(jìn)行脫蛋白比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,酶-Sevag法聯(lián)用是脫除紫蛇尾中粗多糖中蛋白質(zhì)最為有效的方法。采用傳統(tǒng)的水提和堿提法得到兩種紫蛇尾多糖粗品,測(cè)定這兩種紫蛇尾粗多糖的的部分常規(guī)理化性質(zhì),并對(duì)其進(jìn)行分離純化。采用改進(jìn)的平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定紫蛇尾粗多糖是否具有抑菌活性以及對(duì)不同醇沉濃度的粗多糖進(jìn)行了抑菌活性的比較,并采用濾紙片法對(duì)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證。采用改進(jìn)的瓊脂稀釋法測(cè)定了紫蛇尾粗多糖的最低抑菌濃度。研究結(jié)果表明所提取的6種紫蛇尾粗多糖均具有抑

5、菌活性。采用化學(xué)方法測(cè)定紫尾粗多糖的抗氧化活性,其中包括對(duì)紫蛇尾粗多糖的還原能力的測(cè)定,對(duì)超陽(yáng)離子和羥基離子的清除能力的測(cè)定以及抑制紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化能力的測(cè)定。研究結(jié)果表明,紫蛇尾粗多糖具有較強(qiáng)抗氧化能力,能有效的清除羥自由基、超氧陰離子,抑制紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化,且其抗氧化能力與劑量成正相關(guān)性。采用過(guò)氧化法構(gòu)建了心肌細(xì)胞H9c2的氧化模型,測(cè)定了紫蛇尾粗多糖對(duì)H9c2氧損傷的保護(hù)作用,以及對(duì)由氧損傷引起的H9c2細(xì)胞凋亡率、線粒體膜電位、BCl-2、Bax表達(dá)、AKT細(xì)2+胞通路的影響,以及對(duì)缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)Ca濃度的影響。研究表明紫蛇尾粗多糖在較低的濃

6、度下均能對(duì)由氧損傷引起的H9c2細(xì)胞凋亡率、線粒體膜電位、BCl-2、Bax表達(dá)、AKT細(xì)胞通路,2+以及缺氧心肌細(xì)胞內(nèi)Ca濃度產(chǎn)生明顯的影響。關(guān)鍵詞:紫蛇尾;多糖;提取工藝;脫蛋白工藝;分離純化;理化性質(zhì);抑菌活性;抗氧化活性;對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用IV煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractInthispaper,OphippholismirabilismirabilisfromtheChangdaoArchipelagowereusedastheexperimantalmaterial.Theextractionprocessofpolysacchari

7、dewasoptimizedbytheorthogoralexperiment.Theproteinremovalingprocess,thephysicalandchemicalproperties,theseprationandpurificationprocessandpartofbiologicalactivity,including:theantibacterialactivity,theantioxidantactivityandtheprotectionofmyocardicalcellswerealsodetermined.Allofth

8、eseprovidethenecessarytheoreticalbasisfo

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