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1、中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所碩士研究生畢業(yè)論文摘要丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)是一種嚴重危害人類健康的病毒。丙型肝炎由丙型肝炎病毒引起。目前全球約有1．7億~2．0億HCV感染者，此感染者中70*／*"85％可發(fā)展成為慢性感染，病程可達20～30年，約有20％可發(fā)展成肝硬化，其中又有20％可轉化為肝細胞癌。目前對于HCV慢性感染尚無高效的特異性治療方法，僅局限于采用療效欠佳的聚乙二醇干擾素Q和利巴韋林等抗病毒途徑，但副作用較大，因此研制HCV疫苗對于控制HCV流行具有重要意義。由于HCV基因序列存在高度變異性，導致H
2、CV相似株的存在和免疫逃避現(xiàn)象，使HCV得以逃避宿主免疫機制，造成HCV持續(xù)感染，同時不論在體內還是體外，HCV感染后均能產(chǎn)生中和抗體，但這些抗體具有嚴格的毒株特異性，對變異毒株缺乏有效的交叉中和保護作用，因此研制有效的HCV疫苗必須能夠誘導機體產(chǎn)生針對不同HCV株的交叉免疫保護作用。本研究結合NS區(qū)相關抗原表位在抗HCV免疫反應中具有重要意義的研究結果，在前期七表位序列基礎上增加了三個具有保守意義的NS區(qū)抗原表位。根據(jù)HCV免疫反應的主要效應機制為細胞免疫，以T細胞表位為主，B細胞表位為輔，分別從HCV六個基因型中選取具有代表意義的保守表位，
3、理論上可以代表HCV的基本抗原結構，同時考慮中國人種基因頻率較高的HLA分子限制性HCV抗原表位。根據(jù)現(xiàn)有資料，本研究在十個表位之間使用了鉸鏈區(qū)作為間隔，以保證各表位有充分的空間旋轉可能。該重組抗原表位多肽轉化大腸桿菌DH5a后，通過篩選獲得高效表達重組蛋白的工程菌。表達產(chǎn)物以包涵體形式存在，包涵體經(jīng)洗滌溶解復性及一系列純化步驟后，獲得純度較高的目的蛋白。Westernblot結果顯示純化的重組抗原表位多肽具有良好的抗原反應性。重組抗原表位多肽免疫小鼠和恒河猴后，ELISA實驗檢測結果顯示，該重組抗原表位多肽在小鼠和恒河猴體內獲得了較高的抗體免
4、疫水平。本研究成功將重組抗原表位多肽HCVe在大腸桿菌DH5a中高效表達，對蛋白表達、復性純化等實驗條件進行了初步探索；在BALB／e小鼠和恒河猴體內，對該重組抗原表位多肽的免疫學效應做了初步研究，為本課題后續(xù)靈長類動物實驗提供了很好的實驗資料。與此同時，本研究正在構建恒河猴MHC．肽中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所碩士研究生畢業(yè)論文摘要四聚體，已經(jīng)獲得構建四聚體的MHC-BSP蛋白和132m蛋白，這為下一步構建四聚體提供了實驗基礎。一旦四聚體構建成功，將能夠精確定量分析實驗動物接受重組表位抗原多肽HCVe免疫后，體內CTL活性的變化情況，以此確
5、定該重組表位抗原多肽的最佳免疫效果。關鍵詞：丙型肝炎病毒多表位疫苗多表位抗原原核表達與純化BALB／c小鼠恒河猴ELISAMHC．肽四聚體2中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所碩上研究生畢業(yè)論文摘要AbstractThehepatitisCvirus(HCV)isamajorpublichealthproblem．HepatitisCisaliverdiseasecausedbyHCV．Anestimated170millionindividualsarechronicallyinfected、析mHCVand3-4millionindividual
6、salenewlyinfectedeachyear．Approximately80％ofnewlyinfectedsubjectsprogresstochronicinfection．Cirrhosis，whichdevelopsinapproximately10-20％ofchronicallyinfectedpatients，isassociatedwithahighriskoflivercancer(1—5％ofchronicallyinfectedindividualsoveraperiodof20-30years)．Thecurren
7、tlyrecommendedtherapyofchronicHCVinfectionisthecombinationofapegylatedinterferonalfaandribavirin．Combinationtherapywithpegylatedinterferonandribavirinisthetreatmentofchoice，resultinginsustainedvirologicresponseratesof400／'0-80％．SodevelopmentofaneffectivevaccineagainstHCVisve
8、ryimportantforthecontrolofHCVprevalence．Howeverithaslongbeendefinedasadiffi
