人參皂苷rg3對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的pd模型多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用及其機(jī)制研究

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1、人參皂苷R93對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的PD模型多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用及其機(jī)制研究三人參皂苷R93對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的PD模型多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用及其機(jī)制研究中文摘要帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是一種常見(jiàn)于中老年人的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其主要病理特征為黑質(zhì)(SubstantiaNigra，SN)致密部多巴胺(dopamine，DA)能神經(jīng)元的進(jìn)行性變性死亡和路易氏小體(Lewybody,LB)的形成，引起黑質(zhì)紋狀體通路中DA水平的降低，最終導(dǎo)致整個(gè)基底神經(jīng)節(jié)環(huán)路功能的改變。患者大多表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)遲緩、肌肉僵直、震顫和步態(tài)不穩(wěn)等。PD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，一般認(rèn)為可能與氧化應(yīng)激、線

2、粒體損傷、神經(jīng)免疫炎癥和神經(jīng)興奮性毒性有關(guān)。人參皂苷R93(ginsenosideR93，以下簡(jiǎn)稱R93)是中國(guó)傳統(tǒng)中藥人參的有效成分，R93能預(yù)防和治療癌癥、改善心臟血管功能、抗血小板凝集、保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞和提高機(jī)體免疫力。本課題組前期研究表明，R93能減輕魚藤酮納米脂質(zhì)載體(R-NLC)誘導(dǎo)的PD模型大鼠行為運(yùn)動(dòng)障礙，并能有效抑制黑質(zhì)DA神經(jīng)元凋亡。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，這一作用與R93減弱氧化應(yīng)激反應(yīng)、上調(diào)Bcl．2和Bax的比值以及抑制caspase通路激活有關(guān)。作為上述工作的繼續(xù)，本實(shí)驗(yàn)采用魚藤酮誘導(dǎo)PCI2細(xì)胞損傷模型，用R-NLC制備PD大鼠模型，從體內(nèi)、體外兩條途徑，進(jìn)一步

3、確證人參皂苷R93對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用，著重探討p38MAPK．iNOS．NO通路在其中的作用，以進(jìn)一步探討R93保護(hù)DA能神經(jīng)元的分子生物學(xué)機(jī)制。主要結(jié)果如下：1．人參皂苷R93對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的PD模型DA能神經(jīng)元的保護(hù)作用方法：PCI2細(xì)胞分組：(1)對(duì)照組：O．I％DMSO；(2)模型組：lpM魚藤酮；(3)lpM魚藤酮+0．31259MR93；(4)lgM魚藤酮+0．6259MR93；(5)lgM魚藤酮+1．259MR93；(6)lgM魚藤酮+2．5p．MR93；(7)lgM魚藤酮+59MR93。R93溶液在魚藤酮前4小時(shí)加入，用MTT法測(cè)定24h各組細(xì)

4、胞OD值，計(jì)算細(xì)胞存活率，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡率。動(dòng)物分組：(1)對(duì)照組：SC空白NLC+i90．5％CMC-Na；(2)模型組：SCR-NLC+i90．5％CMC．Na；(3)陽(yáng)性藥物組：SCR-NLC+ig司來(lái)吉蘭(1lmg／kg)；(4)R93低劑量組：SCR—NLC+igR93(3mg／kg)；(5)R93中劑量組：SCR-NLC+igR93(6mg／kg)；(6)R93高劑量組：SCR．NLC+igR93(12mg／kg)。大鼠皮下注射(sc)R-NLC，首劑量0．5mg／kg，第二次0．8mg／kg，揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文2一此后每次lmg／kg，全程2天一次，共28天

5、。其它藥物提前3天灌胃給藥，每天一次，共31天。末次注射給藥后24h，分離大鼠黑質(zhì)和紋狀體。以評(píng)分法考察大鼠行為學(xué)表現(xiàn)、HE染色觀察黑質(zhì)細(xì)胞形態(tài)，高效液相．電化學(xué)法測(cè)定紋狀體DA含量。結(jié)果：(1)對(duì)PCI2細(xì)胞損傷的影響：模型組OD值為0．340士0．007，細(xì)胞存活率為69．5％，0．3125、0．625、1．25、2．5、59MR93組OD值分別為O．354士0．011(P<0．05)，0．388士0．018(P<0．01)，0．423士0．009(P<0．01)，0．441士0．007(P<0．01)和0．416士0．007(P<0．01)，細(xì)胞存活率分別為72．4％，79．

6、3％，86．5％，90．3％和85．1％，與模型組比較有顯著升高。(2)對(duì)PCI2細(xì)胞凋亡的影響：魚藤酮使PCI2細(xì)胞出現(xiàn)早期和晚期凋亡，總凋亡率達(dá)71．1％(P

7、R93干預(yù)后能明顯改善上述變化。⑨紋狀體DA含量：模型組紋狀體DA含量為0．57士0．11nmol／g，較對(duì)照組(14．15士3．68nmol／g)顯著降低(尸