微小rna-16(microrna-16)下調(diào)表達(dá)在心肌肥厚中的作用機(jī)制研究

《微小rna-16(microrna-16)下調(diào)表達(dá)在心肌肥厚中的作用機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、碩士學(xué)位論文微小RNA-16（microRNA-16）下調(diào)表達(dá)在心肌肥厚中題目的作用機(jī)制研究MechanismstudyoftheroleofmicroRNA-16英文題目downregulationincardiachypertrophy姓名黃帥學(xué)號(hào)11020170所在學(xué)院醫(yī)學(xué)院導(dǎo)師姓名單志新專業(yè)藥理學(xué)入學(xué)日期2010.09.01答辯日期2013.05.30學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的工作研究及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在論文中以明

2、確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人授權(quán)汕頭大學(xué)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？蓪⒈緦W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存和匯編論文；學(xué)?？梢韵驀矣嘘P(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文并授權(quán)其保存、借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。對于保密的論文，按照保密的有關(guān)規(guī)定和程序處理。作者簽名：導(dǎo)師簽名：日期：年月日日期：年月Ⅰ汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文全文摘要心肌肥厚是一種常見的心血管疾病，是心肌重構(gòu)中非常重要的方面，晚期的結(jié)局往往會(huì)引發(fā)心力衰竭或猝死

3、。心肌肥厚分子機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，現(xiàn)已證實(shí)心肌肥厚的發(fā)生與細(xì)胞周期調(diào)控，鈣信號(hào)調(diào)控等多種信號(hào)途徑相關(guān)，全面揭示心肌肥厚發(fā)生的分子機(jī)制對于治療心肌肥厚尤為重要。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類內(nèi)源性小片段非編碼RNA，可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因表達(dá)，參與細(xì)胞的生長、發(fā)育、分化和多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程。多個(gè)研究證實(shí)，miRNAs參與了心肌肥厚的發(fā)生過程。微小RNA-16（miR-16）是腫瘤學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。據(jù)報(bào)道，在慢性淋巴細(xì)胞白血病患者中miR-16表達(dá)下調(diào)，恢復(fù)miR-16表達(dá)可起到抑制腫瘤的作用。miR-16是心肌組織中中等豐度表達(dá)的miRNA，其在心肌肥厚

4、中的作用尚無報(bào)道。擬通過腹主動(dòng)脈縮窄(AAC)手術(shù)，制備大鼠心肌肥厚模型，研究miR-16在發(fā)生肥厚的大鼠心肌中的表達(dá)和在心肌肥厚中的調(diào)控作用，并進(jìn)一步明確調(diào)控miR-16表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。已有研究顯示，細(xì)胞周期素（Cyclin）在心肌肥厚時(shí)表達(dá)增強(qiáng)，推動(dòng)細(xì)胞周期由G1向S期轉(zhuǎn)化，進(jìn)而促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大。我們發(fā)現(xiàn)，miR-16在心肌肥厚時(shí)表達(dá)下調(diào)，生物信息學(xué)分析提示，CyclinD1、CyclinD2和CyclinE1基因的3’UTR存在miR-16潛在的作用位點(diǎn)。本文提出以下科學(xué)假設(shè)：miR-16下調(diào)可促進(jìn)CyclinD1、CyclinD2和CyclinE1表達(dá)，推動(dòng)

5、細(xì)胞周期由G1向S期轉(zhuǎn)化，進(jìn)而促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大。第一部分大鼠腹主動(dòng)脈縮窄（AAC）致心肌肥厚模型的制備和鑒定目的建立因后負(fù)荷增加引起的大鼠心肌肥厚模型。方法選用SD大鼠，體重約220g～250g，隨機(jī)分四組，即假手術(shù)組（Sham）、模型AAC1周（AAC-1w）、AAC2周（AAC-2w）、AAC3周（AAC-3w），每組8只。模型組采用0.3mm的動(dòng)脈銀夾縮窄大鼠的腹主動(dòng)脈，假手術(shù)組只分離腹主動(dòng)脈，不造成縮窄。利用小動(dòng)物B超檢測心臟結(jié)構(gòu)和功能。通過心肌切片的HE染色，觀察心臟形態(tài)變化。通過熒光定量PCR檢測肥厚早期標(biāo)志性基因心房利尿肽（ANP）、β-肌球蛋白重鏈（β-

6、MHC）的mRNA表達(dá)水平。采用Westernblot方法檢測ANP和β-MHC的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果AAC模型組較假手術(shù)組大鼠的心臟體積變大，左心室/脛骨長度比顯著增加；在AAC-2w和AAC-3w組的大鼠，心室前后壁增大，左室間隔半徑縮短；左心室短軸縮短指數(shù)（FS%）和左心室射血分?jǐn)?shù)（EF%）均顯著降低。ANP、β-MHC的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高。結(jié)論采用腹主動(dòng)脈狹窄法成功建立了由壓力后負(fù)II汕頭大學(xué)碩士學(xué)位論文荷增加引起的大鼠心肌肥厚模型。第二部分miR-16在心肌肥厚中的表達(dá)變化目的明確大鼠心肌肥厚時(shí)miR-16的表達(dá)變化。方法采用熒光定量PCR，檢測大

7、鼠肥厚心肌中miR-16的宿主基因SMC4、miR-16前體及miR-16成熟體水平。采用原代分離培養(yǎng)乳大鼠心肌細(xì)胞，經(jīng)苯腎上腺素（PE）處理后，檢測ANP、β-MHC、SMC4、miR-16前體及miR-16成熟體表達(dá)。結(jié)果成功建立PE誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞肥大模型，心肌細(xì)胞表面積增大，細(xì)胞RNA合成增加，ANPmRNA表達(dá)顯著上調(diào)。在整體心肌肥厚模型和肥大心肌細(xì)胞中，一致性地證實(shí)SMC4、miR-16前體及miR-16成熟體表達(dá)降低。結(jié)論在整體和細(xì)胞水平上證實(shí)，miR-16在大鼠心肌肥厚時(shí)下調(diào)表達(dá)。第三部分miR-16對心肌細(xì)胞肥大的調(diào)控