資源描述：
《酵母分離株分子鑒定及其揮發(fā)性香氣成分檢測(cè)分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、食品與發(fā)酵工業(yè)FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES酵母分離株分子鑒定及其揮發(fā)性香氣成分檢測(cè)分析付俊淑,莊世文,徐丹丹,劉瑩,曾琳姣,黃金海(天津大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院,天津,300072)摘要測(cè)定了8類不同食品來(lái)源的12株酵母分離株26SrDNAD1/D2序列,與Genbank登陸序列比較分析,12株分離酵母鑒定為:3株釀酒酵母,2株戴爾有孢圓酵母、1株馬克斯克魯維氏酵母、1株喜仙人掌畢赤酵母、1株魯西坦念珠菌、1株膜噗畢赤酵母、2株Kudriavzevii畢赤酵母,1株疑似新種。選用固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用(SPME-GC/MS)方法,
2、完成了各分離株揮發(fā)性成分的檢測(cè)。結(jié)果表明,酵母發(fā)酵后的香氣組分主要為酯類,包括乙酸乙酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、癸酸乙酯等,其中菌株A1發(fā)酵后產(chǎn)生多種含量較高的揮發(fā)性組分及獨(dú)有組分己酸乙酯。結(jié)果表明,酵母產(chǎn)生的香氣組分、含量與酵母分離來(lái)源、種類有關(guān),這可能與不同酵母代謝途徑的差異相關(guān)。關(guān)鍵詞酵母菌,分子鑒定,26SrDNA,酵母產(chǎn)香,SPME-GC/MS酵母分離株種屬的傳統(tǒng)鑒定主要基于酵母形態(tài)自制酸奶酵母分離株YOH。所有菌株由天津大學(xué)農(nóng)和生理生化特性上的差異,其種水平上的分類,主要業(yè)與生物工程學(xué)院食品安全實(shí)驗(yàn)室提供。依據(jù)對(duì)糖類化合物的發(fā)酵和對(duì)碳、氮源化合物
3、的同化試驗(yàn)所用培養(yǎng)基:麥芽汁液體培養(yǎng)基、豆芽汁培[4]能力,對(duì)外源維生素的依賴性和不同溫度下生長(zhǎng)能力養(yǎng)基、YEPD液體培養(yǎng)基,配制方法參照文獻(xiàn)。[5]等生理學(xué)特性。這些特征多是表型性狀,難以反11112主要試劑映種間親緣關(guān)系,而且因試驗(yàn)條件不同重現(xiàn)性不好。DGL2000DNAMarker(北京普博欣生物科技有大量研究表明,分子生物學(xué)方法對(duì)酵母菌進(jìn)行鑒定,限責(zé)任公司);dNTPs、TaqDNAPolymerase(215可很好的區(qū)分種間及種內(nèi)差異,縮短鑒定時(shí)間,可靠U/LL)(天根生物技術(shù)有限公司);蝸牛酶(天津華生性高,目前典型的方法是對(duì)酵母26SrDNA
4、D1/D2序生物技術(shù)公司);山梨醇(天津科威公司);其他試劑列測(cè)定分析。均為分析純,購(gòu)于天津各試劑公司。酵母菌廣泛應(yīng)用于啤酒、白酒和果汁飲料的生11113主要儀器產(chǎn),其生物合成過(guò)程中會(huì)形成多樣的代謝產(chǎn)物,從而DYCZ-24D雙垂直電泳槽,北京市六一儀器廠;P[2,6]對(duì)食品風(fēng)味產(chǎn)生重要影響。本研究利用SPME-@E012PCR儀,賽默飛世爾公司;GIS-2009紫外凝GC/MS的方法對(duì)不同食品源酵母分離株在培養(yǎng)基中膠成像儀,Tanon公司;手動(dòng)SPME進(jìn)樣器;100Lm的產(chǎn)香進(jìn)行研究,旨在了解不同酵母產(chǎn)香的差異,探PDMS纖維萃取頭,美國(guó)Supleco公司
5、;GC-14C氣相討酵母產(chǎn)香的代謝途徑,為篩選有食品開(kāi)發(fā)潛力的酵色譜儀島津公司;15mL進(jìn)樣瓶;HP5890/5975GC/母菌株提供依據(jù)。MS聯(lián)用儀(美國(guó)安捷倫公司)。1材料與方法112試驗(yàn)方法11211PCR擴(kuò)增111材料[8]酵母DNA提取參照文獻(xiàn),26SrDNAD1/D2區(qū)11111菌種來(lái)源及培養(yǎng)基序列擴(kuò)增引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。引試驗(yàn)所用菌株12株:天津葡萄酒渣酵母分離株物序列為:NL-1:5-'GCATATCAATAAGCGGAG-P3;寧夏蘋(píng)果果渣酵母分離株A1;內(nèi)蒙農(nóng)家干酪分離GAAAAG-3,'NL-4:5-'GGTCCGTG
6、TTTCAAGACGG-3,'酵母5株,分別編號(hào)為S2、S3、S4、S5、S6;西藏牦牛酸反應(yīng)條件:94e3min;94e40s,48e45s,72e45s,5奶酵母分離株XZ;寧夏胡蘿卜渣中酵母分離株H;新個(gè)循環(huán);94e40s,53e45s,72e45s,25個(gè)循環(huán);疆羊奶酪酵母分離株Y;新疆牛奶酪酵母分離株N;72e8min。PCR產(chǎn)物測(cè)序由上海生工生物技術(shù)有限第一作者:碩士研究生(黃金海副教授為通訊作者)。公司完成。收稿日期:2009-10-15,改回日期:2009-12-1011212序列比較分析442010Vo1l36No12(Total266)
7、研究報(bào)告測(cè)序的26SrDNAD1/D2區(qū)序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源序列搜索(BLAST),比較供試菌株與已知酵母菌相應(yīng)序列的同源性,確定酵母種屬。11213固相微萃取(SPME)取3種培養(yǎng)基各50mL分別按1%比例接種不同酵母分離株,30e培養(yǎng)48h,室溫放置24h。取發(fā)酵液8mL于15mL的樣品瓶?jī)?nèi),加入2gNaCl加蓋封口,將老化好的萃取頭插入樣品瓶的頂空部分,于45e的磁力攪拌器上1000r/min萃取30min,在進(jìn)M-DGL2000marker,2-泳道為水對(duì)照;3-14泳道分別為菌株S2,S3,S4,S5,S6,H,樣口解吸5-10m
8、in(溫度250e),用于氣相的檢測(cè)。A1,XZ,YOH,N,P3
