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《抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)化及活性物質研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、分類號——UDC——學號叢!!Q225密級——理學碩士學位論文抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)化及活性物質研究揚州大學二O一四年五月ClassifiedIndex:U.D.C.:M.S.DissertationThestudyonthecultureoptimizationandactivesubstancesofantitumotactivitemicrobesMajor:EnvironmentalScienceAdviser:MiaoLiGraduateStudent:ZhouHui.ruYangzhouUniversityMay2014周惠茹抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)化及活性物質研究抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)
2、化及活性物質研究摘要由于動植物資源的不合理開發(fā)和利用,帶來了一系列環(huán)境問題,人們開始意識到微生物資源的重要性。在微生物資源的開發(fā)過程中,微生物藥物,尤其是抗腫瘤微生物藥物的開發(fā),漸漸成為該領域的研究熱點。本文選取了在前期研究中發(fā)現的兩株抗腫瘤活性菌株,米曲霉彳印P曙f,,“sD穢Z口PYX.5和微小鏈霉菌&—印幻叼圮囂p口W甜,塒HY026,對其發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化,以優(yōu)化后的培養(yǎng)基開展規(guī)模化發(fā)酵,提取出代謝產物,以抗腫瘤活性為指導,提供一定的理論基礎和潛在的應用價值。本文的主要研究結果如下:(1)以察氏培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基,以發(fā)酵后的菌體干重、粗提物質量和粗提物抗腫瘤活性為指標,通過單因素實驗
3、選出合適的碳源和氮源,再以選出的碳源、氮源以及K2HP04、MgS04·7H20、KCl共5個因素進行正交實驗,確定米曲霉彳.D壚韶YX.5的最適發(fā)酵培養(yǎng)基配方,最終確定的培養(yǎng)基配方為:葡萄糖45g/L,蛋白胨8g/L,K2HP040.5∥L,MgS04‘7H20O.2g/L,KCllg/L,FeS04O.01∥L。優(yōu)化后菌體干重、代謝物的產量和抗腫瘤活性分別提高了41.88%、226.52%和19.31%。(2)以高氏一號培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基,通過單因素實驗選出適合微小鏈霉菌Sp刪”,淞HY026的碳源和氮源,最終確定的培養(yǎng)基配方為:可溶性淀粉20.Og/L,黃豆粉20.O∥L,K2HP04
4、O.5g/L,MgS04’7H20O.5g/L,NaCl0.5∥L,FeS04。7H20O.019/L。優(yōu)化后菌體干重、代謝物的產量和抗腫瘤活性分別提高了299.22%,65.31%和27.58%。通過對兩株菌發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化,明顯提高了代謝物質產量和抗腫瘤活性,這對后期的規(guī)?;l(fā)酵中減小發(fā)酵規(guī)模和降低工作量十分有利。(3)米曲霉彳.D形陽PYX.5經規(guī)?;l(fā)酵60L后得到粗提物22.91g,以極性大小為依據,對粗提物進行兩次減壓硅膠柱層析,活性組分主要集中在30:1、20:1和15:1的二氯甲烷/甲醇相中,將這些活性組分混合,進行減壓ODS柱層析,甲醇水梯度洗脫,分段收集,經抗腫瘤活性測試
5、發(fā)現活性較高的組分為50%和60%甲醇洗脫的餾分,這兩個組分的極性相近,因此將這兩個組分混合,以分子量大小為依據,經葡萄糖凝膠柱層析,得到純度較高的活性組分,經過核磁共振分析和質譜分析,確定其為羥基曲霉酸。II揚州大學碩士學位論文(4)微小鏈霉菌Sp刪甜,“sHY026經規(guī)?;l(fā)酵80L后得到粗提物5.013g,以不同比例的二氯甲烷/甲醇溶液作為洗脫溶劑,經兩次減壓硅膠柱層析,得到兩個純度較高的活性組分,經HPLC檢測發(fā)現兩個組分中主要成分一致,對其進行核磁共振分析和質譜分析,確定其為放線菌素D。關鍵詞:微生物資源,抗腫瘤活性物質,培養(yǎng)基優(yōu)化,代謝產物分離,結構鑒定周惠茹抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)
6、化及活性物質研究IllThestudyonthecultureoptimizationandactivesubstancesofantitumoractivitemicrobesAbstractDuetoaseriesofenvironmentalproblemscausedbytheunreasonabledevelopmentandutilizationofanimalandplantresources,peoplehaverealizedtheimportanceofmicrobialresources,especiallyinthefieldofbioactivenaturalpro
7、ductsdevelopment.Inthiscase,thedevelopmentofmicrobialagents,especiallyofantitumoragents,hasbecomeoneofthehottesttopicstheseyears.Inthispaper,wehadoptimizedthefermentationmediumoftwoantitumorisolates--Asperg