抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)化及活性物質研究

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1、分類號——UDC——學號叢!!Q225密級——理學碩士學位論文抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)化及活性物質研究揚州大學二O一四年五月ClassifiedIndex：U．D．C．：M．S．DissertationThestudyonthecultureoptimizationandactivesubstancesofantitumotactivitemicrobesMajor：EnvironmentalScienceAdviser：MiaoLiGraduateStudent：ZhouHui．ruYangzhouUniversityMay2014周惠茹抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)化及活性物質研究抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)

2、化及活性物質研究摘要由于動植物資源的不合理開發(fā)和利用，帶來了一系列環(huán)境問題，人們開始意識到微生物資源的重要性。在微生物資源的開發(fā)過程中，微生物藥物，尤其是抗腫瘤微生物藥物的開發(fā)，漸漸成為該領域的研究熱點。本文選取了在前期研究中發(fā)現的兩株抗腫瘤活性菌株，米曲霉彳印P曙f，，“sD穢Z口PYX．5和微小鏈霉菌&—印幻叼圮囂p口W甜，塒HY026，對其發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化，以優(yōu)化后的培養(yǎng)基開展規(guī)模化發(fā)酵，提取出代謝產物，以抗腫瘤活性為指導，提供一定的理論基礎和潛在的應用價值。本文的主要研究結果如下：(1)以察氏培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，以發(fā)酵后的菌體干重、粗提物質量和粗提物抗腫瘤活性為指標，通過單因素實驗

3、選出合適的碳源和氮源，再以選出的碳源、氮源以及K2HP04、MgS04·7H20、KCl共5個因素進行正交實驗，確定米曲霉彳．D壚韶YX．5的最適發(fā)酵培養(yǎng)基配方，最終確定的培養(yǎng)基配方為：葡萄糖45g／L，蛋白胨8g／L，K2HP040．5∥L，MgS04‘7H20O．2g／L，KCllg／L，FeS04O．01∥L。優(yōu)化后菌體干重、代謝物的產量和抗腫瘤活性分別提高了41．88％、226．52％和19．31％。(2)以高氏一號培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，通過單因素實驗選出適合微小鏈霉菌Sp刪”，淞HY026的碳源和氮源，最終確定的培養(yǎng)基配方為：可溶性淀粉20．Og／L，黃豆粉20．O∥L，K2HP04

4、O．5g／L，MgS04’7H20O．5g／L，NaCl0．5∥L，FeS04。7H20O．019／L。優(yōu)化后菌體干重、代謝物的產量和抗腫瘤活性分別提高了299．22％，65．31％和27．58％。通過對兩株菌發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化，明顯提高了代謝物質產量和抗腫瘤活性，這對后期的規(guī)?；l(fā)酵中減小發(fā)酵規(guī)模和降低工作量十分有利。(3)米曲霉彳．D形陽PYX．5經規(guī)?；l(fā)酵60L后得到粗提物22．91g，以極性大小為依據，對粗提物進行兩次減壓硅膠柱層析，活性組分主要集中在30：1、20：1和15：1的二氯甲烷／甲醇相中，將這些活性組分混合，進行減壓ODS柱層析，甲醇水梯度洗脫，分段收集，經抗腫瘤活性測試

5、發(fā)現活性較高的組分為50％和60％甲醇洗脫的餾分，這兩個組分的極性相近，因此將這兩個組分混合，以分子量大小為依據，經葡萄糖凝膠柱層析，得到純度較高的活性組分，經過核磁共振分析和質譜分析，確定其為羥基曲霉酸。II揚州大學碩士學位論文(4)微小鏈霉菌Sp刪甜，“sHY026經規(guī)?；l(fā)酵80L后得到粗提物5．013g，以不同比例的二氯甲烷／甲醇溶液作為洗脫溶劑，經兩次減壓硅膠柱層析，得到兩個純度較高的活性組分，經HPLC檢測發(fā)現兩個組分中主要成分一致，對其進行核磁共振分析和質譜分析，確定其為放線菌素D。關鍵詞：微生物資源，抗腫瘤活性物質，培養(yǎng)基優(yōu)化，代謝產物分離，結構鑒定周惠茹抗腫瘤活性菌的培養(yǎng)優(yōu)

6、化及活性物質研究IllThestudyonthecultureoptimizationandactivesubstancesofantitumoractivitemicrobesAbstractDuetoaseriesofenvironmentalproblemscausedbytheunreasonabledevelopmentandutilizationofanimalandplantresources，peoplehaverealizedtheimportanceofmicrobialresources，especiallyinthefieldofbioactivenaturalpro

7、ductsdevelopment．Inthiscase，thedevelopmentofmicrobialagents，especiallyofantitumoragents，hasbecomeoneofthehottesttopicstheseyears．Inthispaper,wehadoptimizedthefermentationmediumoftwoantitumorisolates--Asperg