mir-21調(diào)控舌鱗癌細胞凋亡實驗的研究

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1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文miR-21調(diào)控舌鱗癌細胞凋亡的實驗研究姓名：李勁松申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：黃洪章20080515中山大學(xué)博士學(xué)位論文miR．21調(diào)控舌鱗癌細胞凋亡的實驗研究miR一21調(diào)控舌鱗癌細胞凋亡的實驗研究專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)博士研究生：李勁松博士生導(dǎo)師：黃洪章教授中文摘要舌鱗狀細胞癌(tonguesquamouscellcarcinoma，TSCC)是最常見的口腔惡性腫瘤，約占口腔惡性腫瘤的43．4％。舌鱗狀細胞癌常造成患者的語言、進食等功能障礙及顏面部的畸形，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量。舌鱗癌常常發(fā)生早期頸

2、淋巴轉(zhuǎn)移，且轉(zhuǎn)移率較高。近二十年來，盡管臨床上舌鱗癌的綜合治療已經(jīng)很普遍，但以手術(shù)為豐，放化療為輔的綜合治療對舌鱗癌生存率的提高并不明顯，5年總體生存率仍然較低，徘徊在50％～55％左右，并沒有顯著提高，中晚期患者的5年生存率更低，約為27％，而且這些方法都存在各自的局限性，特別是對中晚期和復(fù)發(fā)患者療效不佳，對伴有遠處轉(zhuǎn)移者療效更差。因此，尋找更安全有效的治療途徑是提高舌鱗狀細胞癌牛存率和生存質(zhì)量所嘔待解決的難題。大量的研究已經(jīng)證實，人類疾病的發(fā)生發(fā)展直接和間接地與基因密切相關(guān)，因此，可以認為人類的疾病都是基因病。所以從本質(zhì)上來說，舌鱗狀

3、細胞癌也是一種基因病，與細胞的牛長增殖和凋亡失控等密切相關(guān)。從理論上講，基因治療有望解決這些問題，所以惡性腫瘤的基因治療是近十幾年來的研究熱點。但長期以來人們一直不遺余力地尋找某一基因和某一疾病的對應(yīng)關(guān)系，由于概念與技術(shù)的局限，把這種尋找變成了一對一的簡單線性關(guān)系的研究，有“零敲碎打”之嫌，致使目前基因治療的效果不盡人意。由于腫瘤的發(fā)生發(fā)展涉及多個編碼基因的改一T一中山大學(xué)博士學(xué)位論文miR．2l調(diào)控舌鱗癌細胞凋亡的實驗研究變，只是單純抑制某個基因的表達，難以有效地起到抑癌作用。可喜的是，人類基因組計劃已于2003年4月完成全部序列測定，

4、進入了后基因組時代即功能基因組學(xué)時代，基因組科學(xué)完成了一次歷史性轉(zhuǎn)折，而疾病基因組學(xué)也不斷取得成果，在觀念和技術(shù)上，初步實現(xiàn)了由“零敲碎打”向“整體闡明”的轉(zhuǎn)折。舌鱗癌細胞與其它惡性腫瘤一樣，其生物學(xué)特性取決于其特異表達的基因，而在腫瘤發(fā)展過程中必然伴隨著不同的基因表達變化。那么，調(diào)控舌鱗癌細胞特異的基因表達及其發(fā)展過程中基因表達變化的生物學(xué)機制是什么?對于這一問題，雖然目前還沒有確切的答案，但是，近年非編碼RNA(non-codingRNAs)，特別是微小分子RNA(microRNA，miRNA)調(diào)控基因表達研究的興起給回答該問題提供了

5、新的線索。內(nèi)源性miRNA可調(diào)控數(shù)十到數(shù)百個基因的表達，因此，腫瘤細胞內(nèi)起到“促癌”和“抑癌”作用的非編碼miRNA比編碼的癌基因和抑癌基因少得多，可以成為更穩(wěn)定有效的抗癌靶點。miRNAs的研究分析提示，miRNAs參與生命過程中一系列的重要進程，包括發(fā)育、造血、器官形成、凋亡、細胞增殖，甚至是腫瘤發(fā)生。在眾多相關(guān)疾病中，惡性腫瘤的miRNA表達異常最受矚目。根據(jù)高通量的miRNA微陣列和實時定量RT-PCR(quantitativereal-timePCR，qRT-PCR)分析，發(fā)現(xiàn)在多種人類惡性腫瘤中，包括結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、腎癌

6、、胃癌、淋巴瘤、白血病等的miRNA表達譜與它們來源的正常組織存在很大區(qū)別，這種區(qū)別在低分化和惡性程度高的腫瘤組織表現(xiàn)得更顯著些。在某些惡性腫瘤中，miRNA含量比來源的正常組織明顯降低，腫瘤分化越差，miRNA的含量也越低，如在乳腺痛組織中，miR-lOb、let一7、miR一125b和miR-145等的表達明顯下調(diào)。而某些miRNA在腫瘤組織內(nèi)的表達卻有所上升，如乳腺癌中的miR-21和miR-155。惡性腫瘤miRNA表達的變化說明腫瘤細胞基因調(diào)控機制發(fā)生改變，與cDNA微陣列比較，miRNA表達譜能為癌腫的分子分期和分型提供更準(zhǔn)確

7、的信息。隨著新的miRNA的不斷發(fā)現(xiàn)及其功能的逐漸明確，使得miRNA的研究倍受關(guān)注，成為當(dāng)前研究的熱點之一。大量研究發(fā)現(xiàn)在癌細胞中表達異常的miRNA的靶基因?qū)儆诎┗蚧蛘咭职┗?，這些靶基因都與細胞的增殖、凋亡或分化密切相關(guān)。正是因為miRNA具有調(diào)節(jié)癌基因或者抑癌基因表達的功能，故其自身也充當(dāng)著“抑癌基因”和“癌基因”的角色。然而在頭頸腫瘤，特別是以舌鱗癌為代表中山大學(xué)博上學(xué)位論文miR．21調(diào)控舌鱗癌細胞凋亡的實驗研究的口腔鱗狀細胞癌中相關(guān)miRNA及其功能的研究未見報道。本研究采用高通量的miRNA微陣列篩選出不同分期的舌鱗癌組

8、織和癌旁正常組織中差異表達的內(nèi)源性miRNA，獲得舌鱗癌細胞的miRNA表達譜；選取在早期和中晚期舌鱗癌中都顯著高表達的miR-21為進一步研究對象，通過qRT—PCR驗證其在50例不同分期舌