血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究

血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究

ID:32476042

大?。?62.12 KB

頁數(shù):8頁

時間:2019-02-07

血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究_第1頁
血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究_第2頁
血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究_第3頁
血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究_第4頁
血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究_第5頁
資源描述:

《血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、牲科學(xué)發(fā)展觀促進(jìn)科技創(chuàng)新(三)657TfmW內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實驗研究④房思煉1黃洪章2孔祥波2王勇3游云華1王建廣2吳忠道41.中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院口腔頜面外科,廣東珠海,519000;2.中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院口腔頜面外科;3.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院臨床藥理基地;4.中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原微生物教研室摘要目的:在建立的順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡的體外模型上,研究VEGF對舌鱗癌細(xì)胞凋亡的影響。方法:分別采用MTT法、倒置相差顯微鏡觀察、DNA瓊脂糖凝膠電泳法、TuNEL原位標(biāo)記法及流式細(xì)胞術(shù)等多種手段檢測舌鱗癌細(xì)胞的凋亡、壞死及存活狀態(tài),以觀察OinglmL、lng

2、/mL、lOngfmL、lOOng]mL外濼性VEGF對頗鉑誘導(dǎo)的TCa8113細(xì)胞凋亡的作用,并同時觀察0.04ng/mL、0.4#g/mL抗人vEGF單克隆抗體與vEGF作用后.其作用的變化。結(jié)果:不同終濃度的ⅦGF均可對抗15t,g/LCDDP謗導(dǎo)Tca8113細(xì)胞凋亡的作用。VEGF既可延緩細(xì)胞凋亡的啟動,又可降低細(xì)胞凋亡率,且隨VEGF的濃度升高,這種作用逐漸增強(qiáng)。同時,證實抗人VEGF單抗可拮抗VEGF對抗凋亡的作用,且呈劑量依賴性趨勢。同時結(jié)果也提示,VEGF對抗凋亡的作用具有一定的時效性。結(jié)論:vEGF具有抑制舌舛癌細(xì)胞凋亡的生物學(xué)作用,從而起到間接保護(hù)其生存的作用。本實

3、驗結(jié)果提示我們。對腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制應(yīng)有多方面的認(rèn)識,才能審l定曼合理而有效的治療策略。關(guān)鍵詞口腔醫(yī)學(xué)血管內(nèi)皮生長因子鱗狀細(xì)胞癌凋亡血管內(nèi)皮細(xì)胞生長匱I-T-(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是近年來發(fā)現(xiàn)的最重要的促腫瘤血管生成調(diào)控因子。新近研究表明,VEGF尚具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。本實驗采用15t*g/mLCDDP誘導(dǎo)的人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞凋亡作模型,在體外實驗中觀察加入外源性VEGF對Tca8113細(xì)胞凋亡的作用,探討VEGF在舌鱗癌化療抵抗中的作用。一、材料與方法(一)材料1.細(xì)胞株人舌鱗癌細(xì)胞株Tea8113,引自上海第二醫(yī)科

4、大學(xué)第九人民醫(yī)院口外實驗室。2.主要試劑胎牛血清、RPMI1640、四氮甲唑藍(lán)(MTT)、碘化丙啶(pmmideiodine,Pi)、TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、VEGF及anti—humanVEGFmonoclonalantibody,其余試劑均為分析純試劑。①基金項目:廣東省自然科學(xué)基金(021837)、廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究基金(A2002197)資助。658蘭竺蘭竺竺苧堡蘭墜蘭竺蘭蘭====;—=======;===$d===========;==========;i=============口i———————————————————一(二)方法1.細(xì)胞培養(yǎng)7Yca8113細(xì)胞

5、用含10%FCS的RPMI1640(含100U/L青、鏈霉素),置37"C,pH7.2,5%C02培養(yǎng)箱中飽和濕空氣傳代培養(yǎng),2~3d換液。實驗時,取對數(shù)生長期細(xì)胞,消化后收集細(xì)胞并以1000r/min離心10min,用Hanks液洗滌兩次后計數(shù),再用全培養(yǎng)液調(diào)整至所需細(xì)胞濃度備用。2.舌鱗癌細(xì)胞增殖狀態(tài)的檢測取以上細(xì)胞以每孔1.2×104個細(xì)胞接種于進(jìn)口96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)24h后,傾棄培養(yǎng)基,用Hank’s液洗滌兩次后,再培養(yǎng)于分別含終濃度為01、1、10、100ng/mLVEGF和15pg/mL的CDDP的10%FCSRPMI1640,或含0.04、0.4"g/mL的抗VEGF單克隆

6、抗體、10ng/mLVEGF和1599/mLCDDP的10%FCSRPMI1640,每組設(shè)3個復(fù)孔,對照組為全培養(yǎng)基,調(diào)零組為不含藥物及細(xì)胞的培養(yǎng)液。培養(yǎng)到6、12、18、24、48h前4h,每孔加新鮮配制MTT液(5mg/mL)20td,繼續(xù)培養(yǎng)4h至出現(xiàn)藍(lán)色結(jié)晶,加DMS0150v1/孔,振蕩10min溶解,用酶聯(lián)免疫檢測儀于490nm波長測定吸光度值,每組3個孔數(shù)據(jù)取均數(shù)。以時間為x軸,吸光度值為Y軸作圖,動態(tài)描述各組細(xì)胞的增殖狀態(tài)。3.外源性VEGF對CDDP誘導(dǎo)的舌鱗癌細(xì)胞凋亡的影響取對數(shù)生長期細(xì)胞以1×106/皿分種于35mm塑料培養(yǎng)皿中(10%FCSRPMI1640培養(yǎng)液體

7、積為1.5mL/皿)培養(yǎng)24h,傾棄培養(yǎng)基,Hank’S液洗滌兩次,在各培養(yǎng)皿中分別同時加入終濃度0.1ng]mL、lng/mL、10ng/mL、100ng/mL的VEGF和15颼/mL的CDDP的10%FCSRPMI1640,或終濃度0.0499/mL、0,4旭/mL的抗VEGF單克隆抗體、10ng/mLVEGF和15pg/mLCDDP的10%FCSRP—MI1640,培養(yǎng)6h、12h、18h、24h,進(jìn)行以下各項細(xì)胞凋亡指標(biāo)的檢

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文

此文檔下載收益歸作者所有

當(dāng)前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文
溫馨提示:
1. 部分包含數(shù)學(xué)公式或PPT動畫的文件,查看預(yù)覽時可能會顯示錯亂或異常,文件下載后無此問題,請放心下載。
2. 本文檔由用戶上傳,版權(quán)歸屬用戶,天天文庫負(fù)責(zé)整理代發(fā)布。如果您對本文檔版權(quán)有爭議請及時聯(lián)系客服。
3. 下載前請仔細(xì)閱讀文檔內(nèi)容,確認(rèn)文檔內(nèi)容符合您的需求后進(jìn)行下載,若出現(xiàn)內(nèi)容與標(biāo)題不符可向本站投訴處理。
4. 下載文檔時可能由于網(wǎng)絡(luò)波動等原因無法下載或下載錯誤,付費完成后未能成功下載的用戶請聯(lián)系客服處理。