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《血管內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、牲科學(xué)發(fā)展觀促進(jìn)科技創(chuàng)新(三)657TfmW內(nèi)皮生長因子對抗順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究④房思煉1黃洪章2孔祥波2王勇3游云華1王建廣2吳忠道41．中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院口腔頜面外科，廣東珠海，519000；2．中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院口腔頜面外科；3．南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院臨床藥理基地；4．中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原微生物教研室摘要目的：在建立的順鉑誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡的體外模型上，研究VEGF對舌鱗癌細(xì)胞凋亡的影響。方法：分別采用MTT法、倒置相差顯微鏡觀察、DNA瓊脂糖凝膠電泳法、TuNEL原位標(biāo)記法及流式細(xì)胞術(shù)等多種手段檢測舌鱗癌細(xì)胞的凋亡、壞死及存活狀態(tài)，以觀察OinglmL、lng
2、／mL、lOngfmL、lOOng]mL外濼性VEGF對頗鉑誘導(dǎo)的TCa8113細(xì)胞凋亡的作用，并同時觀察0．04ng／mL、0．4#g／mL抗人vEGF單克隆抗體與vEGF作用后．其作用的變化。結(jié)果：不同終濃度的ⅦGF均可對抗15t,g／LCDDP謗導(dǎo)Tca8113細(xì)胞凋亡的作用。VEGF既可延緩細(xì)胞凋亡的啟動，又可降低細(xì)胞凋亡率，且隨VEGF的濃度升高，這種作用逐漸增強(qiáng)。同時，證實(shí)抗人VEGF單抗可拮抗VEGF對抗凋亡的作用，且呈劑量依賴性趨勢。同時結(jié)果也提示，VEGF對抗凋亡的作用具有一定的時效性。結(jié)論：vEGF具有抑制舌舛癌細(xì)胞凋亡的生物學(xué)作用，從而起到間接保護(hù)其生存的作用。本實(shí)
3、驗(yàn)結(jié)果提示我們。對腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制應(yīng)有多方面的認(rèn)識，才能審l定曼合理而有效的治療策略。關(guān)鍵詞口腔醫(yī)學(xué)血管內(nèi)皮生長因子鱗狀細(xì)胞癌凋亡血管內(nèi)皮細(xì)胞生長匱I-T-(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是近年來發(fā)現(xiàn)的最重要的促腫瘤血管生成調(diào)控因子。新近研究表明，VEGF尚具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。本實(shí)驗(yàn)采用15t*g／mLCDDP誘導(dǎo)的人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞凋亡作模型，在體外實(shí)驗(yàn)中觀察加入外源性VEGF對Tca8113細(xì)胞凋亡的作用，探討VEGF在舌鱗癌化療抵抗中的作用。一、材料與方法(一)材料1．細(xì)胞株人舌鱗癌細(xì)胞株Tea8113，引自上海第二醫(yī)科
4、大學(xué)第九人民醫(yī)院口外實(shí)驗(yàn)室。2．主要試劑胎牛血清、RPMI1640、四氮甲唑藍(lán)(MTT)、碘化丙啶(pmmideiodine，Pi)、TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、VEGF及anti—humanVEGFmonoclonalantibody，其余試劑均為分析純試劑。①基金項目：廣東省自然科學(xué)基金(021837)、廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究基金(A2002197)資助。658蘭竺蘭竺竺苧堡蘭墜蘭竺蘭蘭====；—=======；===$d===========；==========；i=============口i———————————————————一(二)方法1．細(xì)胞培養(yǎng)7Yca8113細(xì)胞
5、用含10％FCS的RPMI1640(含100U／L青、鏈霉素)，置37"C，pH7．2，5％C02培養(yǎng)箱中飽和濕空氣傳代培養(yǎng)，2～3d換液。實(shí)驗(yàn)時，取對數(shù)生長期細(xì)胞，消化后收集細(xì)胞并以1000r／min離心10min，用Hanks液洗滌兩次后計數(shù)，再用全培養(yǎng)液調(diào)整至所需細(xì)胞濃度備用。2．舌鱗癌細(xì)胞增殖狀態(tài)的檢測取以上細(xì)胞以每孔1．2×104個細(xì)胞接種于進(jìn)口96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)24h后，傾棄培養(yǎng)基，用Hank’s液洗滌兩次后，再培養(yǎng)于分別含終濃度為01、1、10、100ng／mLVEGF和15pg／mL的CDDP的10％FCSRPMI1640，或含0．04、0．4"g／mL的抗VEGF單克隆
6、抗體、10ng／mLVEGF和1599／mLCDDP的10％FCSRPMI1640，每組設(shè)3個復(fù)孔，對照組為全培養(yǎng)基，調(diào)零組為不含藥物及細(xì)胞的培養(yǎng)液。培養(yǎng)到6、12、18、24、48h前4h，每孔加新鮮配制MTT液(5mg／mL)20td，繼續(xù)培養(yǎng)4h至出現(xiàn)藍(lán)色結(jié)晶，加DMS0150v1／孔，振蕩10min溶解，用酶聯(lián)免疫檢測儀于490nm波長測定吸光度值，每組3個孔數(shù)據(jù)取均數(shù)。以時間為x軸，吸光度值為Y軸作圖，動態(tài)描述各組細(xì)胞的增殖狀態(tài)。3．外源性VEGF對CDDP誘導(dǎo)的舌鱗癌細(xì)胞凋亡的影響取對數(shù)生長期細(xì)胞以1×106／皿分種于35mm塑料培養(yǎng)皿中(10％FCSRPMI1640培養(yǎng)液體
7、積為1．5mL／皿)培養(yǎng)24h，傾棄培養(yǎng)基，Hank’S液洗滌兩次，在各培養(yǎng)皿中分別同時加入終濃度0．1ng]mL、lng／mL、10ng／mL、100ng／mL的VEGF和15颼／mL的CDDP的10％FCSRPMI1640，或終濃度0．0499／mL、0，4旭／mL的抗VEGF單克隆抗體、10ng／mLVEGF和15pg／mLCDDP的10％FCSRP—MI1640，培養(yǎng)6h、12h、18h、24h，進(jìn)行以下各項細(xì)胞凋亡指標(biāo)的檢
