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1、分類號(hào)：R722密級(jí)：公開學(xué)校代碼：11065學(xué)號(hào)：Y0115130051專業(yè)博士學(xué)位論文氙氣對(duì)腦白質(zhì)損傷新生大鼠腦組織Bax、Bcl-2蛋白及EphrinB2、EphB4mRNA表達(dá)的影響作者姓名李亮亮指導(dǎo)教師姜紅（教授）專業(yè)領(lǐng)域兒科學(xué)培養(yǎng)單位醫(yī)學(xué)部?jī)嚎茖W(xué)系答辯日期2018年5月13日氙氣對(duì)腦白質(zhì)損傷新生大鼠腦組織Bax、Bcl-2蛋白及EphrinB2、EphB4mRNA表達(dá)的影響摘要目的通過脂多糖聯(lián)合缺氧缺血制作腦白質(zhì)損傷動(dòng)物模型，檢測(cè)氙氣干預(yù)對(duì)腦白質(zhì)損傷新生大鼠腦組織內(nèi)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平變化及氙氣干預(yù)對(duì)腦白質(zhì)損傷新生大鼠腦組織內(nèi)Ep
2、hB4和EphrinB2mRNA表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的發(fā)生機(jī)制，為早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的臨床干預(yù)提供理論依據(jù)。方法將3日齡Sprague-Dawley（SD）新生大鼠120只隨機(jī)分為對(duì)照組（n=24），腦損傷組（n=24）和氙氣干預(yù)組（n=72）。對(duì)照組新生鼠腹腔注射生理鹽水（0.05mg/kg），僅游離但不結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，不做低氧處理；腦損傷組腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS，0.05mg/kg），游離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈并低氧處理1小時(shí)建立腦白質(zhì)損傷（whitematterdamage，WMD）模型；氙氣干
3、預(yù)組腹腔注射LPS（0.05mg/kg），游離并結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈后進(jìn)行低氧處理1小時(shí)并進(jìn)行氙氣吸入處理（50%氙氣+30%氧氣+20%氮?dú)獬掷m(xù)處理3小時(shí)）。根據(jù)腦損傷后氙氣開始干預(yù)的時(shí)間分為C1、C2、C3三個(gè)亞組（n=24），干預(yù)時(shí)間分別為腦損傷發(fā)生后的0小時(shí)、2小時(shí)和5小時(shí)。各組新生鼠分別于0h、24h、48h、72h各取6只行多聚甲醛灌注后斷頭取腦組織，進(jìn)行腦組織病理檢測(cè)、蛋白質(zhì)印跡法（WesternBlot,WB）檢測(cè)Bax蛋白、B淋巴細(xì)胞瘤-2（B-celllymphoma-2，Bcl-2）蛋白含量。同時(shí)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（revers
4、etranscriotion-polymerasechainreaction，RT-PCR）檢測(cè)EphBrin2、EphB4mRNA的表達(dá)。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析和Bonferroni法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果（1）實(shí)驗(yàn)新生鼠行為學(xué)監(jiān)測(cè)：對(duì)照組新生幼鼠未出現(xiàn)明顯異常反應(yīng)。腹腔注射脂多糖及缺氧缺血處理后，腦損傷組和氙氣干預(yù)組的新生鼠出現(xiàn)肢體抖動(dòng)、煩躁、紫紺、呼吸急促等行為學(xué)異常。腦損傷組異常癥狀約在72小時(shí)消失。C1組新生鼠的癥狀約在36小時(shí)后消失；而C2組和C3組的癥狀約在48小時(shí)后消失。（2）腦組織病理變化：HE染色顯示腦損傷組可見腦白質(zhì)蒼白
5、，結(jié)構(gòu)疏松，細(xì)胞腫脹，核膜不清楚，細(xì)胞核固縮，可檢測(cè)到細(xì)胞變性和壞死，神經(jīng)纖維無序，膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加；氙氣干預(yù)C1組可見腦白質(zhì)染色淡染，結(jié)構(gòu)相對(duì)較完整，較少細(xì)胞變性壞死，病理變化較腦損傷組明顯減輕。C2組可見細(xì)胞排列紊亂，部分核固縮；IC3可見腦白質(zhì)組織結(jié)構(gòu)疏松，核膜不清楚，細(xì)胞核固縮。C2、C3組病理變化較C1組明顯，但病理改變較腦損傷組減輕。TUNEL染色顯示對(duì)照組細(xì)胞凋亡不明顯；與對(duì)照組比較，腦損傷組細(xì)胞凋亡明顯。在C1、C2、C3組對(duì)比中，隨開始干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡逐漸明顯，但均較腦損傷組減輕。（3）WB檢測(cè)Bax蛋白含量：在相同的各檢測(cè)時(shí)間
6、點(diǎn)，C1組和C2組Bax蛋白表達(dá)較腦損傷組顯著下降，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；C3組Bax蛋白較腦損傷組在0h、48h、72h時(shí)下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在24h檢測(cè)點(diǎn)無顯著差異（P>0.05）。各實(shí)驗(yàn)組之間Bax蛋白表達(dá)量的差異在0h檢測(cè)點(diǎn)并不顯著，隨著取樣時(shí)間的推移，氙氣干預(yù)組Bax蛋白表達(dá)水平較腦損傷組逐漸降低。（4）WB檢測(cè)Bcl-2蛋白含量：在相同時(shí)間點(diǎn)，C1組和C2組蛋白的表達(dá)較腦損傷組顯著性升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。C3組Bcl-2蛋白較腦損傷組在24h、48h、72h時(shí)升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<
7、0.05），在0h檢測(cè)點(diǎn)無顯著差異（P>0.05）。各實(shí)驗(yàn)組之間Bcl-2蛋白表達(dá)量的差異在0h檢測(cè)點(diǎn)并不顯著，隨著取樣時(shí)間的推移，氙氣干預(yù)組Bcl-2蛋白表達(dá)水平較腦損傷組逐漸升高。（5）RT-PCR檢測(cè)EphB4、EphrinB2mRNA含量：與對(duì)照組相比較，在各檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)的腦損傷組中，新生鼠腦室周圍白質(zhì)EphrinB2、EphB4mRNA的表達(dá)水平顯著升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（6）與腦損傷組相比較，C1組及C2組EphrinB2mRNA的表達(dá)量在各個(gè)檢測(cè)點(diǎn)均顯著下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；C3組EphrinB2mRN
8、A的表達(dá)量在48h時(shí)顯著下降（P<0.05），在0h、24h、72h時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.0
