資源描述：
《沙門菌屬stn基因lamp快速檢測方法的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterStudyonLAMPMethodofstnGeneforRapidDetectionofSalmonellaByAihuaLiSupervisor：Prof．DongchunQinDepartmentofPathogenicBiologyBasicMedicineCollegeofZhengzhouUniversitySeptember,2013學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)
2、注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：日期≯脾學(xué)位論文使用授權(quán)聲明紹日本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論
3、文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：日摘要沙門菌屬stn基因LAMP快速檢測方法的建立及應(yīng)用碩士學(xué)位申請人：李愛華推薦導(dǎo)師：秦東春教授鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室河南鄭州450052摘要沙門菌是對人類和動物健康都能構(gòu)成危害的一類致病菌，據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，白二十世紀末以來，沙門菌對人類健康的威脅越來越大，己引起全球衛(wèi)生組織的重視。近年來，隨著進出口貿(mào)易日益繁榮，也使得沙門菌的全球性傳播成為可能，致使口岸出入境樣本檢測工作量急劇增加；而各口岸出入境工作人員結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜，流動快，難以控制，因此建立快
4、速、準(zhǔn)確、簡便的檢測方法保證進出口的安全性迫在眉睫。本研究目的：擬以沙門菌腸毒素基因(Salmonellaenterotoxingene，stn)作為靶基因，建立檢測沙門菌的DNA環(huán)介導(dǎo)的恒溫擴增法((100p—mediatedisothermalamplificationofDNA，LAMP)，對沙門菌屬進行特異性檢測，建立切實可行的快速沙門菌檢測技術(shù)并初步應(yīng)用。方法：1．在GenBank數(shù)據(jù)庫中檢索沙門菌屬stn基因核苷酸序列，提交到PrimerExplorerV4設(shè)計相應(yīng)的LAMP引物，并通過Oligo6．0進行分析，以確保引物之間無二聚體形成；應(yīng)用BLAST
5、程序，通過GenBank對引物及擴增產(chǎn)物進行同源性對比，經(jīng)篩選獲得特異性內(nèi)外引物各一對。2．利用具有鏈置換活性的BstDNA聚合酶在恒溫條件下催化新鏈合成，使目的基因高效擴增。3．對LAMP反應(yīng)體系和反應(yīng)條件進行優(yōu)化，在反應(yīng)體系中添加SYBR．GreenI熒光染料，結(jié)合顯色反應(yīng)，使結(jié)果觀察直觀準(zhǔn)確，能真正實現(xiàn)現(xiàn)場快速簡便檢測。4．用沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)株和非沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)株檢測方法的特異性和敏感性。與摘要表型檢測方法顯色培養(yǎng)基法同時檢測肉、蛋、奶、水產(chǎn)品等樣品共計100份，檢測該方法的實用性。結(jié)果：1．本研究建立的以沙門菌stn基因LAMP快速檢測方法，LAMP反應(yīng)體積259
6、l，在最佳擴增溫度63℃恒溫條件下，時間60rain內(nèi)完成對沙門氏菌的檢測。2．檢測沙門氏菌DNA最低濃度極值為1fg／ml，檢測沙門氏菌菌液最低濃度極值為10cfu／ml。對沙門氏菌株陽性檢出率100％，非沙門氏菌株檢測均為陰性。3．100份檢驗、檢疫樣品檢測結(jié)果與表型檢測方法顯色培養(yǎng)基檢測結(jié)果對比，一致率100％。結(jié)論：本研究建立了沙門菌屬stn基因LAMP檢測方法，并應(yīng)用于沙門菌屬標(biāo)準(zhǔn)株檢測及疑污染沙門菌的檢驗檢疫樣品檢測中，結(jié)果表明該法敏感性、特異性高，簡便快速，不需要昂貴的儀器設(shè)備，操作簡單，不易出現(xiàn)DNA污染。加入熒光染料顯色后，結(jié)果更易于觀察。確實能達
7、到快速檢測沙門菌的目的，是一種適合口岸及基層檢驗、檢疫部門使用的沙門氏菌快速檢測方法。關(guān)鍵詞：沙門菌；沙門菌腸毒素基因；環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)；快速檢測IIAbstractStudyonLAMPMethodofstnGeneforRapidDetectionofSalmonellaPostgraduate：AihuaLiSupervisor：Prof．DongchunQinDepartmentofPathogenicBiologyBasicMedicineCollegeofZhengzhouUniversityZhengzhouHenan450052Salmonel
