重組MVA病毒載體疫苗（MVA-SPD1_MS）的抗腫瘤效果研究

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1、分類(lèi)號(hào)：Ｒ７３單位代碼：１０１８３研究生學(xué)號(hào)：２０１３３４２０１７密級(jí)：吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)術(shù)學(xué)位（）重組ＭＶＡ病毒載體疫苗（ＭＶＡ－ＳＰＤ１／ＭＳ）的抗腫瘤效果研究Ｓｔｕｄｏｎｎ－Ａｔ－ｉｔｕｍｏｒＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｃｏｍｂｙｉｎａｎｔＭＶＡｂａｓｅｄＶａｃｃｉｎｅＭＶＡ－ｓＰＤ／ＭＳ（）作者姓名：徐平專(zhuān)業(yè)：微生物學(xué)研宄方向：腫瘤疫苗指導(dǎo)教師：于湘暉教授培養(yǎng)單位：生命科學(xué)學(xué)院２０１６年６月－ｓＰＤｌ重組ＭＶＡ病毒載體疫苗（ＭＶ

2、Ａ／ＭＳ）的抗腫瘤效果研究－ｍｏ－ＳｔｕｄｏｎＡｎｔｉｔｕｒＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＭＶＡｂａｓｅｄｙＶａｃｃ－ｉｎｅＭＶＡｓＰＤ／ＭＳ（）作者姓名：徐平專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：于湘暉教授學(xué)位類(lèi)別：理學(xué)碩士論文答辯日期：２０１６年／月《日授予學(xué)位日期：年月未經(jīng)本論文作者的書(shū)面授權(quán)，依法收存和保管本論文書(shū)面版本、電子版本的任何單位和個(gè)人，均不得對(duì)本論文的全部或部分內(nèi)容進(jìn)行任何形式的復(fù)制、修改、發(fā)行、出租（但純學(xué)術(shù)性使、改編等有

3、礙作者著作權(quán)的商業(yè)性使用用不在此限）。。否則應(yīng)承擔(dān)侵權(quán)的法律責(zé)任，吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明，本人鄭重聲明：是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下所呈交學(xué)位論文，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：曰期：冰釦中文摘要重組ＭＶＡ病毒載體疫苗ＭＶＡ－ｓＰＤｌ／ＭＳ的抗腫瘤效果研究（）近

4、年來(lái)全球癌癥的發(fā)生率和死亡率呈現(xiàn)持續(xù)快速增長(zhǎng)趨勢(shì)，且這種情況在發(fā)展中國(guó)家尤為嚴(yán)峻，已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康與生命。目前，臨床上治療癌癥的標(biāo)準(zhǔn)手段主包括手術(shù)、放療、化療，在過(guò)去的十年中癌癥免疫療法已逐漸發(fā)一展成為第四種癌癥治療策略。腫瘤基因疫苗作為腫瘤免疫療法的方式之，在醫(yī)學(xué)免疫學(xué)領(lǐng)域被廣泛研究，并且己有多種腫瘤基因疫苗在臨床研宄中取得了可喜的結(jié)果。腫瘤基因疫苗是由編碼腫瘤相關(guān)抗原或腫瘤特異性抗原的基因與真核表達(dá)載體或病毒載體共同組成，腫瘤抗原通過(guò)ＤＮＡ或病毒載體導(dǎo)入人或動(dòng)物體內(nèi)后，表達(dá)抗

5、原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫反應(yīng)及細(xì)胞免疫反應(yīng)，從而產(chǎn)生抗腫瘤的免疫保護(hù)力：、疫。腫瘤基因疫苗設(shè)計(jì)的關(guān)鍵因素主要包括抗原靶點(diǎn)苗載體、免疫佐劑及免疫策略的選擇。自１９８２年ＤＮＡ重組技術(shù)首次應(yīng)用于痘苗病毒開(kāi)始，痘病毒、雞痘病毒金絲雀痘病毒等多種痘病毒被廣泛應(yīng)用于開(kāi)發(fā)基因工程活載體疫苗和生物藥物。涉及癌癥、艾滋病、肝炎、瘧疾和結(jié)核等多種疾病的預(yù)防和治療領(lǐng)域。高度減毒的宿主限制性病毒株ＭＶＡＭｏｄｉｆｉｅｄＶａｃｃｉｎｉａＶｉｒｕｓＡｎｋａｒａ具有外源基因容（）量大、穩(wěn)定高表達(dá)外

6、源基因，、獨(dú)特的安全性及良好的免疫原性等生物學(xué)特性作為疫苗載體在多種傳染病及腫瘤防治的臨床前和臨床研宄中被廣泛應(yīng)用。本課題組在前期的工作中設(shè)計(jì)了以ＭＵＣ１和Ｓｕｒｖｉｖｉｎ為靶點(diǎn)，ＣｐＧ、ｓＰＤｌ、ＤＶ－－Ａｄ－ＭＳＩＬ２為分子佐劑的ＤＮＡ疫苗ＣｐＩＬ２ｓＰＤｌ／ＭＳ及腺病毒載體基因疫苗，－Ａｄｂｏｏｓｔ的免疫策略并且將兩種形式的疫苗聯(lián)合使用ｍｅ，成功，采用ＤＮＡｐｒｉ的在荷瘤鼠模型上誘導(dǎo)出了較強(qiáng)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生了較好的抗腫瘤效果。在本組前期工作的基礎(chǔ)上，，本篇論文主要探究了以ＭＶＡ為載體

7、融合表達(dá)可溶性ｓＰＤｌ以及腫瘤抗原ＭＵＣ１和Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的腫瘤基因疫苗的抗腫瘤效果，同時(shí)也初－步嘗試了其與ＤＮＡ疫苗ＣｐＤＶ－ＩＬ２ｓＰＤｌ／ＭＳ聯(lián)合使用的效果。首先，我們成功地構(gòu)建了融合表達(dá)可溶性ｓＰＤｌ、ＭＵＣ１及Ｓｕｒｖｉｖｉｎ的重組－ｓＰＤ穿梭表達(dá)載體ｐＳＣｌｌＭｌｌ／ＭＳ，然后與痘病毒載體ＭＶＡ重組。通過(guò)大量的Ｉ－ｓ篩選工作，獲得了能夠穩(wěn)定高表達(dá)外源蛋白的重組痘病毒疫苗ＭＶＡＰＤｌ／ＭＳ。同時(shí)．，為了尋找理想的疫苗評(píng)價(jià)體系，我們構(gòu)建了ＲＦＰ標(biāo)記的穩(wěn)定表達(dá)人＋１ｒｖＦＰ

8、－ＭＵＣ和Ｓｕｉｖｉｎ分子的鼠源性黑色素瘤細(xì)胞系ＭＳＢ１６，然后開(kāi)展了不（Ｒ）＋－Ｂ立了黑色素同克?。遥疲校停樱保都?xì)胞的成瘤實(shí)驗(yàn)及成瘤劑量摸索實(shí)驗(yàn)，最終建瘤小鼠腫瘤模型。－然后ｓＰ－ＭＳ，我們考察了單獨(dú)痘病毒載體疫苗ＭＶＡＤｌ以下簡(jiǎn)稱(chēng)ｒＭＶＡ在（）黑色素瘤小鼠模型上的抑瘤效果。結(jié)果表明，陰性對(duì)照ＰＢＳ組小鼠平均瘤重為７．８８±０．８１ｇ、