羊種布魯氏菌015株gmd、per和manb缺失株的構(gòu)建及診斷抗原反應(yīng)原性評價研究

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3、詩．｜禱４；巧疆？，奪｜榮分類號：密級：學(xué)號：2012108029單位代碼：10759石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文羊種布魯氏菌015株gmd、per和manb缺失株的構(gòu)建及診斷抗原反應(yīng)原性評價研究學(xué)位申請人易德武指導(dǎo)教師陳創(chuàng)夫教授申請學(xué)位門類級別農(nóng)學(xué)碩士學(xué)科、專業(yè)名稱預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向畜禽病原分子生物學(xué)所在學(xué)院動物科技學(xué)院中國·新疆·石河子2015年10月ResearchonConstructionandImmunogenicityofΔgmd,ΔperandΔmanbMutantStrainsofBrucellaMelitensis015ADissertationSubmitte

4、dtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByYiDewu(PreventiveVeterinaryMedicine)DissertationSupervisor:Prof.ChenChuangfuOctober,2015石河子大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)牲聲明本人所呈交的學(xué)位論文是在我導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的。

5、己在文中作了明確的說明并表研究成果對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均示謝意。：曰研究生簽?。簳r間年月。秦抑如／含／／義使用授權(quán)聲明本人完全了解石河子大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國家主管部口或指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版。有權(quán)將學(xué)位論文在學(xué)校圖書館保存并允許被查閱。有權(quán)自行或許可他人將學(xué)位論文編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫提供栓索服務(wù)。有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。、：研究生簽《：濟(jì)德新時間年月義。曰ｉ／／導(dǎo)師簽葦：為時間：年月曰夸方?；?。下｜課題來源國家國際科技合作

6、專項(xiàng)項(xiàng)目名稱：新型布魯氏菌疫苗制備技術(shù)的引進(jìn)與應(yīng)用項(xiàng)目編號：2013DFA32380摘要布魯氏菌病是一種人畜共患疾病，對畜牧業(yè)和人類健康構(gòu)成了巨大威脅，被列為B類傳染病。目前還沒有人用布病疫苗，主要是通過布魯氏菌弱毒活疫苗接種動物來防控布病。目前大多數(shù)動物布病疫苗為光滑型的減毒活疫苗，毒副作用較大、無法區(qū)分自然感染和人工免疫等不足。布魯氏菌的致病機(jī)制還不完全清楚。脂多糖(LPS)是布氏桿菌非常重要的毒力因子，具有較強(qiáng)的抗原性。根據(jù)現(xiàn)有的研究表明，LPS的完整性與其胞內(nèi)存活、增殖和毒力等密切相關(guān)。gmd、per和manb都與光滑型布魯氏菌的LPS的生物合成過程有關(guān)。這些基因的缺失

7、可以導(dǎo)致光滑型布魯氏菌變?yōu)榇植谛筒剪斒暇?。目的：本研究通過同源重組缺失了羊種布魯氏菌生物3型流行株015的gmd，per和manb基因，構(gòu)建相應(yīng)的粗糙型缺失株；并在小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7和昆明系小鼠體內(nèi)初步評價其毒力致弱情況，檢測了免疫小鼠血清中IgG和IFN-γ水平；同時分別表達(dá)了gmd，per和manb蛋白，Westernblot驗(yàn)證其反應(yīng)原性；旨在為研發(fā)能區(qū)分疫苗免疫和自然感染的羊種布魯氏菌標(biāo)記性疫苗提供基礎(chǔ)材料。方法：本研究以羊種布魯氏菌015為模板，分別克隆gmd，per和m