轉(zhuǎn)錄因子zmnam056調(diào)控玉米淀粉合成相關(guān)基因表達(dá)的初探

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1、分萊號Ｓ引３學(xué)號Ｓ２０１２２０５８四川巧化大學(xué)碩±學(xué)位論文轉(zhuǎn)錄因子ＺｍＮＡＭ０５６調(diào)控玉米淀粉合成相關(guān)基因表達(dá)的觀探’巧田丹指導(dǎo)教腑黃玉遣教巧學(xué)科專業(yè)作物遺傳育種硏究方向韋乂饋佑育神－Ｉ．，ｉ？？？１＇．Ｉ■．■?。崳姡В牐保崳姡椋崳?，１２０１５年５月ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＳｕｂｍｉｔｔｅｄｉｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒＭＡＳＴＥ民ＤＥＧＲＥＥＴｈｅＡｎ

2、ａｌｓｅｏｆＴｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＺｍＮＡＭ０５６ｙｐＲｅｇｕｌａｔｅｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧｅｎｅｓＲｅｌａｔｅｄｔｏＳｔａｒｃｈＳｎｔｈｅｓｉｓｉｎＭａｉｚｅｙＢｙ：ＬｏｎｇＴｉａｎｄａｎＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＰｒｏｆ－．ＨＵＡＮＧＹｕｂｉＭａ０ｒ：ＣｒｏＧｅ打ｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｊｐｇＷｅｎｉａｎｉｃｈｕａｎＣｈｉｎａ６１１１３０ｊｇ，Ｓ，，Ｍａ２０１５ｙ論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所化得的成

3、來。儀化所知，除了文中特別加Ｗ柄注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包＇含化他個人或集體。經(jīng)化巧或撰弓過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)－？或其它教詩機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。巧身年（硏究生簽名：怎月＾鬥關(guān)于論文使用授巧的聲明，目本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定Ｐ；學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借、閱，可Ｗ采用影印縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可Ｗ用不同方式在

4、不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名；若巧冉Ｊ＾〇（Ｓ年月＾曰心．導(dǎo)師簽名．名＾廠年／月《日摘要一玉米（ＺｅａｍｗＬ．）大糧食作物是世界第，種植面積和產(chǎn)量均居三大糧食作一，。物之首玉米淀粉也是各種植物捷粉中化學(xué)成分最佳的淀粉之如今，隨著世界人口的ｎ益增加，資源及耕地面積的Ｆ１益減少，對作物產(chǎn)量及晶質(zhì)的要求也就越來越高。淀粉的生物合成過程的核也包括ＡＤＰＧ的合成，，多糖鏈的延仲多糖鏈的一個十分復(fù)雜的過程一的分支，多糖鏈的去分支。淀粉的生物合成是，是在系列釀的共同催化下完成的，在好粒勝乳中淀粉合成的最后階段

5、涉及四類非常關(guān)鍵的二磯－ＡＧＰ酶類：腺巧酸葡萄糖焦稱酸化酶（ＡＤＰｇｌｕｃｏｓｅｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｓｅ，ａｓｅ）、淀粉合成酶（Ｓｔａｒｃｈｓｎｔｈａｓｅ，ＳＳ）、淀粉分支酶（Ｓｔａｒｃｈｂｒａｎ油ｉｎ州ｚｙｍｅ，Ｓ目Ｅ）ｙｇ和淀粉去分支酶（Ｓｔａｒｃｈｄｅｂｒａｎｃｈｉｎｇｅｎｚｙｍｅ，ＤＢＥ）。目前對于淀粉相關(guān)合成酶的功能研究做得相對成熟，但對于淀粉合成相關(guān)酶的上游調(diào)控機(jī)制研究，即淀粉合成相關(guān)酶的順式作用元件和反式作用因子的研究報道較少。我們根據(jù)文獻(xiàn)報道和現(xiàn)有基因資源選取在玉米胚乳中特異表達(dá)或高表達(dá)的參與淀粉合成

6、關(guān)鍵酶編碼的８個基因：佛２、軌２、況／、批／／ｆｌ、說／／／〇、ｓ６ｅ／化、Ａａ／－。課題組前期通過ＲＮＡｓｅｑ測定玉米巧粒灌漿時期不同關(guān)鍵點(diǎn)化乳ＲＮＡ表達(dá)譜，篩選了可能參與玉米臟乳淀粉合成的轉(zhuǎn)錄因子；同時利用公共數(shù)據(jù)庫通過共相關(guān)分析、篩選與上述８個淀粉合成相關(guān)基因表達(dá)相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，取相關(guān)系數(shù)極高的轉(zhuǎn)錄因子列為候選轉(zhuǎn)錄因子。我們比較通過這兩種方法篩選到的候選轉(zhuǎn)一錄因子，發(fā)現(xiàn)了個共同的ＮＡＣ家族的轉(zhuǎn)錄因子，并命名為ＺｍＮＡＭ０５６。在此－ＰＣ民ＰＣＲ基礎(chǔ)之上采用半定量ＲＴ或巧光定量、基因瞬時表達(dá)、酵母單雜交Ｗ及亞細(xì)胞定位繼續(xù)驗(yàn)證篩選的轉(zhuǎn)錄因子

7、對淀粉合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)的調(diào)控作用，具體結(jié)果如下：１Ｗ玉米優(yōu)良骨干自交系Ｂ７３為實(shí)驗(yàn)材料，我們成功從玉米胚乳中克隆到該一３９。轉(zhuǎn)錄因子，該基因含有個編碼１個氨基酸的開放閱讀框其他植物氨基酸序列進(jìn)行同源比對，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子含有ＮＡＣ轉(zhuǎn)錄因子特有的Ｎ端ＤＮＡ結(jié)合結(jié)構(gòu)域和Ｃ端轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域。２對心基因表達(dá)模式進(jìn)行了分析。半定量ＰＣＲ結(jié)果表明基因在巧粒中特異表達(dá)，結(jié)果表明基因在；隨后實(shí)時巧光定量ＰＣＲＩ１０授粉后前７天的巧粒中表達(dá)量較低，授粉后天開始大量表達(dá)，授粉后２０天達(dá)到最高，并且發(fā)現(xiàn)同玉米胚乳淀粉合成