光皮樺成花相關(guān)spl基因的克隆、表達(dá)及功能分析

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1、．！分＊號？參密級不保街ＸＪＤＣ６３０碩王學(xué)位論文光皮枠成花相關(guān)乂ＰＺ基因的克隆、表達(dá)及功能分析作者蝕名；牛明月指導(dǎo)教師；林二培副教授學(xué)科專業(yè)名稱；林木遺傳育種研究方向：林業(yè)生物技術(shù)巧在學(xué)院；林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院‘論文提巧日期：２０１５年６月８ＨＩ浙江農(nóng)林大學(xué)Ｉ＆２０１５年６月８日ｍ諭獨創(chuàng)性聲明＂，是本人聲明，所呈交的學(xué)位論文受浙江省基金光皮枠基因功能與序列變＂且是異研究的資助在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下，通過

2、我的努力取得的成果，并自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標(biāo)注和致謝中己經(jīng)作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含在浙江農(nóng)林大學(xué)或其他教育機構(gòu)獲得學(xué)位或證書一而使用過的材料同對本研究做出貢獻(xiàn)的同志，都在論文中作了明確的說明并。與我，由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任。表示了謝意。如被查有嚴(yán)重侵犯他人知識產(chǎn)權(quán)的行為：碎蘭勻日期：必取讀．巧學(xué)位論文作者親筆簽名．論文使用授權(quán)的說明本人完全了解浙江農(nóng)林大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)送交論＾許論文被查閱和

3、借閱，可；學(xué)?？桑坠颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容心采文的復(fù)印件，允用影印。、縮印或其他復(fù)制手段保存論文保密，在＿＿年后解密可適用本授權(quán)書?！酰崳姡蓿崳姴槐Ｃ?，本學(xué)位論文屬＂于不保密。曰Ｖ＂（請在方框內(nèi)打）‘學(xué)位論文作者親筆簽名；斗蝸巧曰期：Ｘｆｅ＇Ｇ靖指導(dǎo)教師親筆簽名：？之堿日期：耐ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterCloning，ExpressionandFunctionalanalysisofFloweri

4、ngrelatedSPLgeneinBetulaluminiferaCandiadate:NIUMing-yueAdviser:LINEr-pei,AssociateprofessorSpeciality:GeneticsandBreedingofForestTreesDateofSubmission:May22,2015ZhejiangA&FUniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaJune，2015摘要摘要SBP-box基因家族是植物特有的一個轉(zhuǎn)錄因子基因

5、家族，廣泛存在于綠色植物中，在成花過程中起關(guān)鍵的調(diào)控作用。本研究以珍貴用材樹種光皮樺為材料，采用RACE的方法，克隆獲得光皮樺的13個SPL基因，通過生物信息學(xué)、亞細(xì)胞定位、熒光定量PCR分析和酵母雙雜交等手段，對其進(jìn)行了功能分析，獲得以下主要結(jié)果。1.序列分析結(jié)果顯示，BlSPL5的ORF最長，達(dá)到3249bp，編碼1082個氨基酸；BlSPL3的ORF最短，僅為450bp，編碼149個氨基酸；在這些光皮樺SPL轉(zhuǎn)錄因子的N端均具有一個保守的SBP結(jié)構(gòu)域，僅在BlSPL4、BlSPL5和BlSPL12

6、的C端含有一個較保守的ANK結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示，這13個BlSPLs分別屬于陸地植物SPL基因的8個不同分支。2.采用RLM-RACE的方法，對BlSPL1、3、6、7、8、9和11的miR156/157剪切位點進(jìn)行了驗證。結(jié)果顯示，除BlSPL8的剪切位點在miR156/157的11/12位外，其余BlSPLs的剪切位點均在10/11位，說明它們的剪切模式有比較強的一致性；而在剪切發(fā)生的位點，除BlSPL9外其余SPL基因均有1個堿基miR156/157錯配。3.利用洋蔥表皮細(xì)胞對部分BlS

7、PL基因進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析，結(jié)果顯示，miR156靶標(biāo)的BlSPL1和3均定位于細(xì)胞核，符合轉(zhuǎn)錄因子的定位特征。4.熒光定量PCR分析結(jié)果表明，BlSPL1、2、5、11、13在雄花序中高表達(dá)，推測它們與成花相關(guān)；miR156及其靶標(biāo)的BlSPLs基因在不同年齡植株中的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，表明該途徑可能是光皮樺童期轉(zhuǎn)換的重要途徑。5.酵母雙雜交結(jié)果顯示，BlSPL1、5、13與BlDELL蛋白有互作，結(jié)合表達(dá)相關(guān)性分析，說明這些功能復(fù)合體可能共同參與GA介導(dǎo)的成花途徑。關(guān)鍵詞：SPL，miR156，開花

8、，光皮樺，表達(dá)分析。IABSTRACTABSTRACTAsaspecifictranscriptionfactorfamilyinplant,SBP-boxplayscriticalrolesinregulationoffloraldevelopment.Inthisstudy,thirteenSPLgeneswereisolatedfromaprecioustimbertreeBetulaluminiferathroughRACEstra