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《小麥β-胡蘿卜素羥化酶基因tahyd過表達(dá)和rnai載體的構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號(hào)學(xué)號(hào)M201271555學(xué)校代碼10487密級(jí)碩士學(xué)位論文小麥β-胡蘿卜素羥化酶基因TaHYD過表達(dá)和RNAi載體的構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化學(xué)位申請(qǐng)人：陳茜學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：何光源教授答辯日期：2015年5月17日ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheMasterDegreeofScienceConstructionandGeneticTransformationofTaHYDOverexpressionandRNAInterference
2、VectorsinWheatCandidate：XiChenMajor：BiochemistryandMolecularBiologySupervisor：Prof.GuangyuanHeHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan,Hubei430070,P.R.ChinaMay,2015獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均
3、已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到，本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在_____年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打”√”）學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日摘要小麥(Trit
4、icumaestivumL.)是世界上最重要的糧食作物之一，改善其營養(yǎng)品質(zhì)是小麥遺傳育種的重要研究方向。類胡蘿卜素含量是衡量小麥營養(yǎng)品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。類胡蘿卜素是最主要的維生素A前體，然而，普通小麥種子中僅能積累少量的類胡蘿卜素和微量的維生素A原。由于對(duì)小麥胡蘿卜素合成知之甚少，通過基因工程提高小麥類胡蘿卜素含量的相關(guān)報(bào)道十分有限。因此，克隆得到小麥類胡蘿卜素代謝途徑中相關(guān)合成酶基因并研究它們?cè)谛←滎惡}卜素合成過程中的作用，對(duì)提高小麥的營養(yǎng)品質(zhì)有著十分重要的意義。β-胡蘿卜素羥基化酶(Carotenehydroxylase,HYD)是植物類胡蘿卜
5、素代謝途徑中重要的合成酶，HYD可以通過羥基化使得胡蘿卜素轉(zhuǎn)化為葉黃素。本研究采用同源克隆的方法，從小麥品種Bobwhite的基因組中克隆得到一條新的胡蘿卜素羥基化酶基因，命名為TaHYD。為研究HYD基因在小麥類胡蘿卜素合成過程中的功能，分別構(gòu)建了TaHYD的過表達(dá)和RNAi載體，并以小麥模式品種Bobwhite為受體材料，利用基因槍法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。提取轉(zhuǎn)基因小麥基因組DNA進(jìn)行PCR鑒定的結(jié)果表明，共獲得2株過表達(dá)和6株RNA干擾轉(zhuǎn)基因陽性植株。通過對(duì)轉(zhuǎn)基因陽性植株進(jìn)行熒光定量和高效液相色譜分析發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照植株相比，過表達(dá)轉(zhuǎn)基因后代中TaHYD基
6、因的表達(dá)顯著上調(diào)，但β-胡蘿卜素的含量卻未發(fā)生顯著變化；而RNAi植株中TaHYD基因表達(dá)顯著下調(diào)，并伴隨著小麥胚乳中的β-胡蘿卜素含量增加。本研究不僅證明了TaHYD基因的表達(dá)和小麥胚乳中的β-胡蘿卜素的含量存在密切的關(guān)系，同時(shí)也為進(jìn)一步利用基因工程的手段特異性提高小麥胚乳中的β-胡蘿卜素提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)證據(jù)。關(guān)鍵詞：小麥；羥基化酶；RNA干擾；β-胡蘿卜素；維生素AIAbstractWheatisoneofthemostimportantfoodcropsworldwide.Improvingthenutritionalvalueofwhea
7、tisanimportantsubjectinwheatgeneticbreeding.Carotenoidcontentisoneoftheimportantparameterstojudgethenutritionalvalue.CarotenoidisamainresourceofprovitaminA.However,thecarotenoidandprovitaminAcontentisverylowinthegrainsofcommonwheat.Weknowlittleaboutcarotenoidsynthesisandonlyfew
8、reportshadreportedaboutimprovingcarotenoidthroughgenet
