土壤中放線菌地分離與純化

《土壤中放線菌地分離與純化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、實用標準文案土壤中放線菌的分離與純化實驗?zāi)康?掌握放線菌的生長特性，微生物的培養(yǎng)方法。2掌握微生物實驗的基本生物技術(shù)，主要包括無菌操作技術(shù)，純種分離技術(shù)，純種培養(yǎng)技術(shù)，以及抗生素檢測等。3掌握合成培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基的制備方法。4學(xué)習(xí)對微生物實驗的中出現(xiàn)問題的分析，解決方法實驗材料藥品：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4?3H2O、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、瓊脂、重鉻酸鉀其他：高壓蒸汽滅菌鍋、扭力天平、藥匙、燒杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、試管、牛皮紙、硫酸紙、線繩、無菌培養(yǎng)皿、鐵鍬

2、、小鏟、酒精棉球、鑷子、玻璃鉛筆。實驗原理文檔實用標準文案放線菌是重要的抗生素產(chǎn)生菌，主要分布在土壤中（主要是鏈霉菌），其數(shù)量僅次于細菌。一般在中性偏堿性、有機質(zhì)豐富、通氣性好的土壤中含量較多。由于土壤中的微生物是各種不同種類微生物的混合體，為了研究某種微生物，就必須把它們從這些混雜的微生物群體中分離出來，從而獲得某一菌株的純培養(yǎng)。分離放線菌常用稀釋倒平板法。根據(jù)放線菌的營養(yǎng)、酸堿度等條件要求，常選用合成培養(yǎng)基或有機氮培養(yǎng)基。如果培養(yǎng)基成分改變，或土壤預(yù)先處理（120℃熱處理1h），或加入某種抑制劑（如加

3、數(shù)滴10%酚等），都可以使細菌，霉菌出現(xiàn)的數(shù)量大大減少，從而淘汰了其它雜菌。再通過稀釋法，使放線菌在固體培養(yǎng)基上形成單獨菌落，并可得到純菌株。放線菌可以產(chǎn)生抗生素，抑制其他菌種的生長，故可用金黃色葡萄球菌（G+）和大腸桿菌（G-）作指示菌鑒別放線菌。高氏一號合成培養(yǎng)基是培養(yǎng)放線菌的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基是采用化學(xué)成分完全了解的純試劑配制而成的培養(yǎng)基，高氏一號培養(yǎng)基：碳源為可溶性淀粉、氮源為KNO3、NaCl、K2HPO4?3H2O、MgSO4?7H2O作為無機鹽，F(xiàn)eSO4?7H2O作為微生物的微量元素，提供

4、鐵離子等組成1.高氏一號合成培養(yǎng)基的制備K2HPO4?3H2O0.125g，可溶性淀粉5g，硝酸鉀0.25,MgSO4?7H2O0.125g，F(xiàn)eSO4?7H2O0.025g，氯化鈉0.125g，瓊脂5g，水250ml。配制時，先依次加入上述藥品（除瓊脂外）順序溶解，加入無菌水至250ml，調(diào)節(jié)pH＝7.4，再加入瓊脂不斷攪拌震蕩至溶化后，121℃滅菌20分鐘。將6套平皿、12只試管滅菌。文檔實用標準文案2.土壤中放線菌的分離1．編號，分裝：取6套無菌平皿，在皿底貼上標簽，注明土壤稀釋液的稀釋度（10-3

5、、10-4、10-5）。每個稀釋度做兩個培養(yǎng)皿。然后在每皿中倒入已溶化并冷凝至50℃左右的高氏一號培養(yǎng)基15~20ml左右，待冷凝成平板?！×砣?支盛有9ml一只盛有10ml無菌水的試管，排列于試管架上，依次標明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6?！?．稀釋傾注分離　稱1g土樣放入10ml無菌水試管中振蕩10min，即10-1的土壤懸液，靜置30s。用無菌吸管無菌操作取10-1濃度的土壤懸液1ml并加入編號10-2的無菌試管中，并吹吸吸管2~3次，吸時伸入管底，吹時離開水面，使其混

6、合均勻。即為10-2濃度的土壤稀釋液。依此類推，直到稀釋至10-5的試管中（每個稀釋度換1支無菌吸管）。如圖　　文檔實用標準文案　3．倒平板分離培養(yǎng)于上述盛有不同稀釋度菌液的培養(yǎng)皿中，倒入溶化后冷卻至45℃左右的高氏培養(yǎng)基約10—15ml，置水平位置，迅速旋動混勻，待凝固。（若融化的培養(yǎng)基溫度太高，會產(chǎn)生太多的冷凝水，影響觀察。）　　用1ml無菌吸管分別精確地吸取10-4、10-5、10-6的稀釋菌液1ml，對號放入編好號的無菌培養(yǎng)皿中，每一濃度對應(yīng)兩個平板。用無菌涂布棒（從濃度小液開始）將加入平板培養(yǎng)基

7、上的土壤稀釋液在整個平板表面涂勻，涂完一個平板用酒精燈滅菌。稀釋涂布平板法　4培養(yǎng)接種完畢，將平皿和試管放入28℃恒溫箱培養(yǎng)7天，觀察平皿上放線菌（主要是鏈霉菌）菌落。菌種純化1、倒平板將加熱融化的高氏一號合成培養(yǎng)基倒平板，并標號。2、平板劃線文檔實用標準文案劃線的方法很多，但無論哪種方法劃線，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使形成單個菌落。常用的劃線方法有下列二種：圖Ⅴ-3劃線分離示意圖⑴分區(qū)劃線用接將培養(yǎng)皿底部用姆指和無名指固定成傾斜狀態(tài)，在火焰旁將培養(yǎng)皿稍微打開。在此同時，用環(huán)狀接種針在火

8、焰旁刮取少許菌苔，在平板培養(yǎng)基的一邊，作第1次平行劃線6～7條，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70°角，用燒過冷卻的接種針，通過第1次劃線部分作第2次平行劃線(圖Ⅴ-3)，然后再用同樣方法，作第3次平行劃線。劃線時，接種針應(yīng)與平板表面成30°角左右。不要使接種針碰到培養(yǎng)皿邊緣，也不要將培養(yǎng)基劃破。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。⑵連續(xù)劃線將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線(圖Ⅴ-4，B)。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置28℃培養(yǎng)。文