青翹提取物的抑菌活性研究

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1、青翹提取物的抑菌活性研究作者：薛慧清，馬雪梅，馬文兵，趙平【摘要】　　目的研究青翹提取物的抑菌活性。方法以金色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念球菌為代表菌種，用K-B紙片擴(kuò)散法對(duì)青翹提取物的抑菌活性進(jìn)行研究。結(jié)果青翹不同提取物對(duì)供試菌均有一定的抑菌活性，其中醋酸乙酯提取物和正丁醇提取物具有較強(qiáng)的抑菌活性。提取物對(duì)金色葡萄球菌的抑菌活性與提取物濃度呈正比，對(duì)大腸桿菌和白色念球菌的抑菌活性與提取物濃度不呈簡單的正比關(guān)系。結(jié)論青翹不同提取物對(duì)金色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念球菌均有抑制作用。【關(guān)鍵詞】青翹；提取物；抑菌活性　　連翹為木犀科(O

2、leaceae)連翹屬(Forsythia)植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實(shí)。連翹藥材商品分為“青翹”和“老翹”。果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收蒸熟，曬干，習(xí)稱“青翹”；果實(shí)熟透顏色發(fā)黃時(shí)采收，曬干，習(xí)稱“老翹”［1］。8　　連翹是中國臨床常用傳統(tǒng)中藥之一，又名黃花條、連殼、青翹、落翹、黃奇丹等。已有的研究報(bào)道表明，連翹種子揮發(fā)油對(duì)3種真菌有明顯的抑制作用，陜西產(chǎn)青翹、老翹和連翹葉均對(duì)大腸桿菌和金色葡萄球菌也有較好的抑制作用［2～6］，上述研究報(bào)道都沒有對(duì)連翹的提取物進(jìn)行系統(tǒng)的抑菌活性研究。本

3、研究首次以山西道地藥材青翹作為研究對(duì)象，比較其不同極性提取物的抑菌活性，旨在為臨床應(yīng)用連翹提供理論依據(jù)?！　?材料與儀器　　1.1藥材青翹200806購自山西省安澤縣連翹GAP生產(chǎn)基地，植物標(biāo)本由山西省藥檢所郭文菊研究員鑒定，植物標(biāo)本現(xiàn)存于山西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心?！　?.2試劑與菌株金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus、大腸桿菌Escherchiacoli、白色念珠菌Candidaalbicans，均由山西省藥品檢驗(yàn)所提供。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購自杭州天和微生物試劑有限公司；牛肉膏購自北京市海淀區(qū)微生物培養(yǎng)基制品廠

4、，蛋白胨購自北京奧特博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，慶大霉素細(xì)菌藥敏試紙購自杭州天和微生物試劑有限公司，所用試劑均為分析純。　　1.38儀器與設(shè)備LR4001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國Heidolph公司）；CA-111型冷卻水循環(huán)系統(tǒng)（上海愛郎儀器有限公司）；SHB-88型水循環(huán)真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；DSX-280B型手提式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）；BBS-DSC型潔凈工作臺(tái)(上海巴艾貝斯科技有限公司)；BS224S-L型電子分析天平（德國Sartoriu

5、s公司）?！　?方法　　2.1青翹提取物的制備取青翹1kg，粉碎，用95%乙醇加熱至70℃回流提取4次，3h/次，減壓濃縮回收溶劑至無醇味，得總提取物320g?？偺崛∥锝?jīng)水懸浮后，用石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇依次萃取，得到的石油醚、氯仿、醋酸乙酯和正丁醇萃取相及萃取后水相提取。取適量各部位浸膏及總浸膏，干燥成粉末，備用?！　?.2抑菌活性分析　　2.2.1藥敏紙片的制備［4］　　將普通定性濾紙用打孔機(jī)打成若干圓形紙片，直徑為6mm，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，放入壓力蒸氣滅菌器中經(jīng)121℃，20min高壓滅菌，干燥。分別取干燥后的

6、不同待試樣品0.5，1.0，2.0mg，用合適的溶劑溶解，將濾紙片放入溶液中，反復(fù)吸取、晾干，直至將溶液吸干，備用?！　?.2.2培養(yǎng)基的制備固體培養(yǎng)基：用天平準(zhǔn)確稱取368g營養(yǎng)瓊脂，加入蒸餾水1000ml，加熱并不斷攪拌，使瓊脂完全溶解。然后放入壓力蒸氣滅菌器中經(jīng)121℃，20min高壓滅菌，取出趁熱倒入經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)皿中，厚度約3～5mm,冷卻凝固后備用。　　液體培養(yǎng)基［7］：用天平準(zhǔn)確稱取牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化鈉0.5g，加入蒸餾水100ml，加熱并不斷攪拌，用1%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH7.2～7.4，然后放

7、入壓力蒸氣滅菌器中經(jīng)121℃，20min高壓滅菌，分裝于試管中，備用。　　2.2.3菌懸液的制備用接種環(huán)分別取各菌種一環(huán)，接種于液體培養(yǎng)基中，放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，用滅菌生理鹽水分別稀釋至1×10-5CFU/ml濃度，備用?！　?.2.4藥物抑菌作用測定采用K-B紙片擴(kuò)散法［8］，用無菌移液管吸取稀釋好的菌懸液0.1ml，置于培養(yǎng)基中央，用涂布棒涂布均勻。用無菌鑷子夾取含藥濾紙片貼在培養(yǎng)基表面，以含藥量為10μg的慶大霉素細(xì)菌藥敏試紙為陽性對(duì)照。放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，觀察抑菌圈，并用十字交叉法測量抑菌圈直徑,結(jié)

8、果以毫米(mm)表示,見表1～3。每種不同含藥量的樣品對(duì)3種菌均做3組平行對(duì)照，結(jié)果取平均值。　　3結(jié)果8　　用青翹不同提取物，以細(xì)菌大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和霉菌白色念珠菌作為指示菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表1～3。表1青翹不同提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈活性，