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《黑曲霉α葡萄糖轉苷酶的產酶條件、純化及其性質研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、廣西大學碩士學位論文黑曲霉α-葡萄糖轉苷酶的產酶條件、純化及其性質研究姓名：劉玉燕申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：梁智群2003.5.1彥廟大-竽碩士學位論文黑曲霉Ⅱ一葡萄糖轉苷酶的產酶條件、純化及其性質研究摘要本實驗室篩選到的一株黑曲霉(Aspergi，，坩niger)M-1，能產生活性較強的Ⅱ一葡萄糖轉苷酶。本研究以黑曲霉M-1為出發(fā)菌株，對其Q一葡萄糖轉苷酶的產酶影響因素、純化、酶學性質以及必需基團進行系統的研究，結果如下：通過對影響黑曲霉M一1產Q一葡萄糖轉苷酶的單因素分析，得液態(tài)發(fā)酵生產d一葡萄糖轉苷酶的最適
2、產酶條件為：4％A，2％B和1％G；在33℃，起始pH值為6．5，轉速為140r／min，接種量為6％，裝液量100mL條件下，發(fā)酵4．Od，酶活力達296．05U／mL，添加O．1mmoI／L的酶作用底物甲基一Q-D-葡萄糖苷對產酶的誘導作用最大。通過硫酸銨分級分離，DEAE—Ce
3、lulose52、DEAE-sepharoseCL一6B和SephadexG-100柱層析，SDS—PAGE等，從黑曲霉M-1酶提取液中分離純化得到d一葡萄糖轉苷酶，分子量約為11OkDa。通過以甲基一Ⅱ-D-葡萄糖苷為底物，對該酶的部分性質進行了
4、研究。，／結果表明：pH值為6．o時最穩(wěn)定：Km值為4．32mmol／L；溫度在小于60＼℃穩(wěn)定：ca”、M92+對酶有激活作用，而cu”、Ag+、Fe2+則表現為抑制作、用。該Q一葡萄糖轉苷酶的N-末端氨基酸序列為N-SVPGTEYVV一94一／在一定條件下分別以對氯汞苯甲酸(pCMB)、巰基乙醇(ME)、乙基癀商盂簿碩士學位論文替一(3一二甲氨慕丙基)碳二暇胺鹽黻鹽(EDC)、一氯藝酸(ClAc)、乙酰商酮、N一溴代琥珀酰征胺(NBS)簿億學修飾劑對Q一葡萄糖轉苷酶的／A器鏨氨基鼗殘基送行選擇修饞，葬測定其酶活力變純，f續(xù)票
5、表翳：pCMB、＼ME、EDO、0IAc陡顯著抑制酶的活性，活力的下降與修飾劑的濃度有關，乙酰丙酮、NBS的修飾對酶的抑制作用不明照。因此，認為Cys、Asp(GJu)和His殘基為d一葡萄糖轉苷酶的必需基團，部分童硫鍵對保護黼的催化K琺艇是必需的。善一一關鍵詞：黑曲霉ja一葡萄糖轉苷酶，發(fā)酵條件?純儀性欲化學修飾痘商大警碩士學位論文FERMENTATIoNCoNDITIoNS．PURIFICATIoNANDCHARACTERIZATIONOFq—TRANSGLUCoSIDASEFROMABSTRACTA．nigerM-1whi
6、chwasscreenedinourlaboratoryproducedastrongly?！?transglucosidase．Inthispaper,studiesonthefermentationconditions，purificationandcharacterizationof0【一transglucosidaseanditsnecessarygroupswascarriedoutinthisdissertation．Themainreportswereasfollowing：Thefermentationcondi
7、tionsinshakingflaskswereinvestigatedbythemethodofsingle-factoranalysis，thesuitablemainmediumwasachieved：whichcontained4％A，2％Band1％G；theA．九喀盯M-1wasinoculatedintolOOmLmediuminflask，shakingin33"Cat140r／minforfourdays，withinitialpH6．5and6％inoculavolume：addingO．1mmol／Lmet
8、hyl0【-D—glucopyranosidehadinductiveeffectonenzymeformation，the旺一transglucosidaseactivityamountedto296．05u／mlByammoniumsulphatefractionalprecipitation，DEAE—cellulose52、DEAE-sepharoseCL-6Banionexchangechromatography、sephadexG一100gelfiltrationandSAS-PAGE，a0【一transglucos
9、idasewaspurifiedfromextractcontentofA．nigerM-1，themolecularweightoftheenzymewasabout3唐商大譬碩士學位論文110∞a．Somepropertiesoftheenzymewereu
