褪黑素對(duì)大鼠肝再灌注損傷的保護(hù)作用

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1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文褪黑素對(duì)大鼠肝再灌注損傷的保護(hù)作用姓名：李建一申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：張文海20030401審文摘要，劈?亭u：一～，／肝移植瞬前已成為治療終末期肝病、肝腫瘸、先天性肝膽疾病的重要且有效的治療方法，但是肝褥灌注損傷仍是制約肝移植成凌鰉主要因豢之一。焉灌注損嫠豹發(fā)病橇理髦今巍未被凳全闡明。褪黑索(Melatonin，Mel)是松果體腺細(xì)胞分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，由于其在多系統(tǒng)、多臟器發(fā)揮籍復(fù)雜的生理、藥理作用，因此疆益受到人假的重規(guī)兩成為研究憋熱點(diǎn)。在黧蠢，有關(guān)褪黑素

2、在褥灌注損傷方蟊露研究較少，有關(guān)Mel在肝再灌注損傷審的作用瓣見報(bào)道。／本實(shí)驗(yàn)以大《《【l為研究對(duì)象，建立肝再灌注損傷模型為乎段，按時(shí)點(diǎn)采集標(biāo)本，對(duì)血清肝組織生化酶系(ALT，AST，AKP)，耩組織勻漿l簿湊過氧純物懿終產(chǎn)鐫(MDA)及肝緩級(jí)菝氧純酶系(SOD，GSH．px)進(jìn)行測(cè)定；對(duì)肝組綴進(jìn)行HE染色及ICAM～1免疫組化染色，光鏡下觀察肝組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行睦鏡殛察翳纓施孩及纓藤器，探瓣褪黑素懟大鼠器要灌注攝臻的影響作用藏其機(jī)制。譙亞細(xì)胞(鬣白表達(dá))水平上，探討褪黑素對(duì)肝再灌注損

3、傷保護(hù)作用的機(jī)制，為褪黑素在臨床肝臟外科的應(yīng)耀提供蒎據(jù)。／實(shí)驗(yàn)材料姆方法l一、實(shí)驗(yàn)材耩1．實(shí)驗(yàn)分組150只健康雄性Wistar大鼠(體重：1909一21％，周齡：6—7周)，建撬努努褪黑素楚溪縫(Mel綴)、滔綮溶攥薅爨塑(Alc緩)·1·纛生理鹽隸對(duì)照綴(NS組)。建立翳囂漶注損傷模餐，缺蠱對(duì)闡均為60分鐘，之尉每組分別按再灌注詹0．5h、lh、6h、12h、24h采集標(biāo)本。2?；昱漳ｖ仕韨洹瘏⒄誎obayashi法，采崴以動(dòng)脈夾央閉肝門靜脈左支、肝動(dòng)肝左支、發(fā)肝管60分鐘之后放群，建立大鼠肝盔葉、中

4、葉再灌注損饒摟墅。3．藥品及給藥方式禚黑素(Melatonin)lg，酒精生理鹽嫩溶解后低溫保存，按體重20mg／kg薅重詩(shī)算繪藥量甓，予塊盤翦箱分鋒鹱靛注射；漆媒對(duì)照疆采取與Mel疆相鬲濃纛的酒精液，生理鹽永對(duì)照組瘸注射同比例的生理鹽水。4+標(biāo)本采集及處理、4，l麻蘚繪翁方式囂粼羹麻醉采取用硫噴妥鈉缺胤手術(shù)前45分鐘(即腹腔給藥前l(fā)=5分鐘)大鼠股二頭胍肌庭注魅，接40ms／ks體重繪藥。4。2擺美試薊HE染色及免疫組化標(biāo)本均采用多聚甲醛磷酸緩沖液。電鑣標(biāo)本則采用Kamovsky液。SOD、GSH．p

5、x、MDA試劑盒均購(gòu)自礴京建殘生饕工程研究甄。盤裳證藉關(guān)試潮魏塞德隧塞靈曼公勰。ICAM一1試劑盒購(gòu)自英國(guó)Serotech公司。4．3相關(guān)儀器透射電子顯徽鎊，黨學(xué)顯擻鑲及其熊像系統(tǒng)／全盤費(fèi)生訖分耩靛／番媾坊冀橇／分光競(jìng)度詩(shī)／德注承?。捍艛埢X器／離心輥，趣聲乳化機(jī)4，4標(biāo)本的采集第一步：大鬣巍濤生訖蘸系第二步：大鼠肝組織勻漿潮二醛及抗筑化酶系·2·第三疹：大鼠肝臟形態(tài)學(xué)、免疫維純及電轆取材二、實(shí)驗(yàn)方法1．血清肝縊織生詫酶系A(chǔ)疆’、A瓣、AKP的灝定(自動(dòng)基仡分輯儀)2．肝縫織揀氧純酶系SOD、CSI-I

6、．px及脬組織過氧純的終產(chǎn)物嫩DA的測(cè)定2．1MDA孵涎定～硫代巴眈妥酸法2+2SOD鶼測(cè)定～黃瞟呤氧化黲法一NBT還原法2．3GSH．px的測(cè)定一D薯NB直接顯色法3．再灌洼損傷肝組織豹病理學(xué)檢查4．ICAM一1免疫綴躐化學(xué)技術(shù)—SP法5。透射電鑲溉察黔細(xì)胞6．?dāng)?shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析：免疫綴純結(jié)暴在400結(jié)光鏡下觀察，計(jì)算每個(gè)高倍襁野中10t3個(gè)細(xì)胞中陽健緬胞個(gè)數(shù)，每張切片計(jì)數(shù)5個(gè)視辯，求出翡值用囂土S表承，得出陋蛙細(xì)腿率。所有數(shù)據(jù)均用統(tǒng)計(jì)專業(yè)軟件SPSS11．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，綴間比較采饜方差分析，各綴闖裙蹴

7、采用SNK梭驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)暴l。大致蠱渣腭緩織生純酶豢1．1ALTALT猩再灌注后備時(shí)點(diǎn)的Mel綴蚜顯著低予Ate及翼S對(duì)照組(P<0。05)，顯Ale鍾與NS組楣比元顯著性差異。l。2ASTAST衣蒜灌注茬6。鈾、12，鐮、24。跳時(shí)點(diǎn)的Mel組攝著低于Ale及NS對(duì)照組(P<0．05)，且各時(shí)點(diǎn)內(nèi)Ale組與NS縫耪魄蘢顯著縫差異。-氣．1．3AKPAKP在再灌注后24．oh時(shí)點(diǎn)的Mel組顯著低于Alc及NS對(duì)照組(P<0．05)，且各時(shí)點(diǎn)內(nèi)Alc組與NS組相比無顯著性差異。2．大鼠肝組織抗氧化酶系及脂質(zhì)

8、過氧化終產(chǎn)物(丙二醛)2．1MDAMDA在再灌注后6．Oh、12．Oh、24．Oh時(shí)點(diǎn)的Mel組顯著低于Mc及NS對(duì)照組(P<0．05)，且各時(shí)點(diǎn)內(nèi)Ak組與NS組相比元顯著性差異。2．2SODSOD在再灌注后12．Oh、24．Oh時(shí)點(diǎn)的Mel組顯著高于Alc及NS對(duì)照組(P<0．05)，且各時(shí)點(diǎn)內(nèi)Alc組與NS組相比元顯著性差異。2．3GSH．pxGSH．px在再灌注后12．Oh、24．0h時(shí)點(diǎn)的Mel組顯著高于Alc及NS對(duì)照組(P<0．