褪黑素對大鼠肝再灌注損傷的保護作用

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1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文褪黑素對大鼠肝再灌注損傷的保護作用姓名：李建一申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：張文海20030401審文摘要，劈?亭u：一～，／肝移植瞬前已成為治療終末期肝病、肝腫瘸、先天性肝膽疾病的重要且有效的治療方法，但是肝褥灌注損傷仍是制約肝移植成凌鰉主要因豢之一。焉灌注損嫠豹發(fā)病橇理髦今巍未被凳全闡明。褪黑索(Melatonin，Mel)是松果體腺細胞分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，由于其在多系統(tǒng)、多臟器發(fā)揮籍復雜的生理、藥理作用，因此疆益受到人假的重規(guī)兩成為研究憋熱點。在黧蠢，有關褪黑素

2、在褥灌注損傷方蟊露研究較少，有關Mel在肝再灌注損傷審的作用瓣見報道。／本實驗以大《《【l為研究對象，建立肝再灌注損傷模型為乎段，按時點采集標本，對血清肝組織生化酶系(ALT，AST，AKP)，耩組織勻漿l簿湊過氧純物懿終產(chǎn)鐫(MDA)及肝緩級菝氧純酶系(SOD，GSH．px)進行測定；對肝組綴進行HE染色及ICAM～1免疫組化染色，光鏡下觀察肝組織細胞形態(tài)學改變；并在此基礎上進行睦鏡殛察翳纓施孩及纓藤器，探瓣褪黑素懟大鼠器要灌注攝臻的影響作用藏其機制。譙亞細胞(鬣白表達)水平上，探討褪黑素對肝再灌注損

3、傷保護作用的機制，為褪黑素在臨床肝臟外科的應耀提供蒎據(jù)。／實驗材料姆方法l一、實驗材耩1．實驗分組150只健康雄性Wistar大鼠(體重：1909一21％，周齡：6—7周)，建撬努努褪黑素楚溪縫(Mel綴)、滔綮溶攥薅爨塑(Alc緩)·1·纛生理鹽隸對照綴(NS組)。建立翳囂漶注損傷模餐，缺蠱對闡均為60分鐘，之尉每組分別按再灌注詹0．5h、lh、6h、12h、24h采集標本。2?；昱漳ｖ仕韨洹瘏⒄誎obayashi法，采崴以動脈夾央閉肝門靜脈左支、肝動肝左支、發(fā)肝管60分鐘之后放群，建立大鼠肝盔葉、中

4、葉再灌注損饒摟墅。3．藥品及給藥方式禚黑素(Melatonin)lg，酒精生理鹽嫩溶解后低溫保存，按體重20mg／kg薅重詩算繪藥量甓，予塊盤翦箱分鋒鹱靛注射；漆媒對照疆采取與Mel疆相鬲濃纛的酒精液，生理鹽永對照組瘸注射同比例的生理鹽水。4+標本采集及處理、4，l麻蘚繪翁方式囂粼羹麻醉采取用硫噴妥鈉缺胤手術前45分鐘(即腹腔給藥前l(fā)=5分鐘)大鼠股二頭胍肌庭注魅，接40ms／ks體重繪藥。4。2擺美試薊HE染色及免疫組化標本均采用多聚甲醛磷酸緩沖液。電鑣標本則采用Kamovsky液。SOD、GSH．p

5、x、MDA試劑盒均購自礴京建殘生饕工程研究甄。盤裳證藉關試潮魏塞德隧塞靈曼公勰。ICAM一1試劑盒購自英國Serotech公司。4．3相關儀器透射電子顯徽鎊，黨學顯擻鑲及其熊像系統(tǒng)／全盤費生訖分耩靛／番媾坊冀橇／分光競度詩／德注承?。捍艛埢X器／離心輥，趣聲乳化機4，4標本的采集第一步：大鬣巍濤生訖蘸系第二步：大鼠肝組織勻漿潮二醛及抗筑化酶系·2·第三疹：大鼠肝臟形態(tài)學、免疫維純及電轆取材二、實驗方法1．血清肝縊織生詫酶系A疆’、A瓣、AKP的灝定(自動基仡分輯儀)2．肝縫織揀氧純酶系SOD、CSI-I

6、．px及脬組織過氧純的終產(chǎn)物嫩DA的測定2．1MDA孵涎定～硫代巴眈妥酸法2+2SOD鶼測定～黃瞟呤氧化黲法一NBT還原法2．3GSH．px的測定一D薯NB直接顯色法3．再灌洼損傷肝組織豹病理學檢查4．ICAM一1免疫綴躐化學技術—SP法5。透射電鑲溉察黔細胞6．數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析：免疫綴純結暴在400結光鏡下觀察，計算每個高倍襁野中10t3個細胞中陽健緬胞個數(shù)，每張切片計數(shù)5個視辯，求出翡值用囂土S表承，得出陋蛙細腿率。所有數(shù)據(jù)均用統(tǒng)計專業(yè)軟件SPSS11．0進行統(tǒng)計，綴間比較采饜方差分析，各綴闖裙蹴

7、采用SNK梭驗。實驗結暴l。大致蠱渣腭緩織生純酶豢1．1ALTALT猩再灌注后備時點的Mel綴蚜顯著低予Ate及翼S對照組(P<0。05)，顯Ale鍾與NS組楣比元顯著性差異。l。2ASTAST衣蒜灌注茬6。鈾、12，鐮、24。跳時點的Mel組攝著低于Ale及NS對照組(P<0．05)，且各時點內(nèi)Ale組與NS縫耪魄蘢顯著縫差異。-氣．1．3AKPAKP在再灌注后24．oh時點的Mel組顯著低于Alc及NS對照組(P<0．05)，且各時點內(nèi)Alc組與NS組相比無顯著性差異。2．大鼠肝組織抗氧化酶系及脂質

8、過氧化終產(chǎn)物(丙二醛)2．1MDAMDA在再灌注后6．Oh、12．Oh、24．Oh時點的Mel組顯著低于Mc及NS對照組(P<0．05)，且各時點內(nèi)Ak組與NS組相比元顯著性差異。2．2SODSOD在再灌注后12．Oh、24．Oh時點的Mel組顯著高于Alc及NS對照組(P<0．05)，且各時點內(nèi)Alc組與NS組相比元顯著性差異。2．3GSH．pxGSH．px在再灌注后12．Oh、24．0h時點的Mel組顯著高于Alc及NS對照組(P<0．