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《RTPCR酶切法對柯薩奇B組病毒的檢測和分型》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
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2、下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名:育蒼日期:?ft3年S月朽盡關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人同意學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門送交學(xué)位論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱。同意學(xué)校及國家有關(guān)機(jī)構(gòu)有權(quán)公布論文的全部或部分內(nèi)容，并采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。論文作者簽“:穿鄉(xiāng)二指導(dǎo)教師簽名日期:a}}.}日期:'yc}3.亨，萬內(nèi)容提要本實驗利用GCG軟件系統(tǒng)確定了柯薩奇B組
3、病毒B,-B6型cDNA中特異的限制性內(nèi)切酶酶切位點，建立了完整的限制性內(nèi)切酶酶切位點庫。我們利用柯薩奇B組病毒不同型別所特有的限制性內(nèi)切酶酶切位點，對柯薩奇B組病毒的cDNA進(jìn)行了分析，從而完成了柯薩奇B組病毒6個型別的鑒定和分型。實驗結(jié)果表明:該檢測方法具有快速、便捷、準(zhǔn)確、無非特異性反應(yīng)的優(yōu)點，其準(zhǔn)確率可達(dá)100%。本研究結(jié)果不僅為病毒性心肌炎的檢測提供了新的方法，也為其它病毒性疾病的檢測開辟了新的思路并奠定了可靠的理論與實驗基礎(chǔ)，因此，該項研究在病毒學(xué)，分子生物學(xué)，檢驗學(xué)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中具有重要的理論與實踐意義。RTPCR酶切法對柯薩奇B組病毒的檢測和分型前言柯薩奇B組病
4、毒CBV(CoxsackiegroupBvirus)是危害人類健康的主要病原體之一1u，它不僅可以引起流行性胸痛，胸膜炎，心包炎_.s}還可以引起病毒性心肌炎‘’、“、6l，造成擴(kuò)張型心肌病，一，’n,sil最終導(dǎo)致碎死或心力衰竭。目前在國內(nèi)，柯薩奇B組病毒引起的病毒性心肌炎患者有日益增多的趨勢，尤其以青少年和老年為主，但迄今為止，臨床上還缺少一種快速，準(zhǔn)確的檢測方法?？滤_奇B組病毒的檢測，最初依賴于病毒培養(yǎng)，但病毒培養(yǎng)方法耗時長，耗費(fèi)高，不能滿足臨床上早期診斷及治療的要求。直到1966年美國科學(xué)家NAKANE發(fā)明酶聯(lián)免疫技術(shù)(Enzyme-linkedimmunosobenta
5、ssay)ELISA的應(yīng)用，柯薩奇B組病毒的快速檢測才開始發(fā)展起來。ELISA方法是利用抗原一抗體特異的免疫學(xué)反應(yīng)和酶學(xué)催化反應(yīng)，以酶促反應(yīng)的放大作用來顯示初級免疫學(xué)反應(yīng)，它由一次或數(shù)次的免疫學(xué)和酶學(xué)反應(yīng)組成，當(dāng)抗原抗體特異結(jié)合后，酶的底物在酶催化作用下發(fā)生水解，氧化生成有色物。在此反應(yīng)中，酶的生物學(xué)活性和產(chǎn)物的RTPCR醉切法對柯薩奇B組病毒的檢測和分型顏色變化呈正比，從而體現(xiàn)了抗原抗體的數(shù)量變化。1980年YolkenRH就利用ELISA方法成功地檢測到了柯薩奇B組病毒的抗原[ion，此后KatzeMG和McCartneyRA等人分別在1980年和1982年利用ELISA方法
6、也檢測到了柯薩奇B組病毒的抗體〔”、,Y)。作為一種單鏈線狀RNA病毒，CBV20面體外殼是由VP=VPa,VP=VP。構(gòu)成的‘’:，’，其中VP.是唯一可以誘導(dǎo)特異性體液免疫反應(yīng)的結(jié)構(gòu)〔’」1。由于CBV各型基因組組內(nèi)同源性為80%,VP,基因各型間同源性又高達(dá)70%0'"，而主要針對VP.所產(chǎn)生的特異性抗體工gm又是ELISA方法中重要的檢測抗體指標(biāo)，所以Igm并不能對其柯薩奇B組1-6型病毒進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別!’司。雖然ELISA相對來說是一種廉價，快速，重復(fù)性好的CBV檢測方法!”，，但是，由于ELISA方法樣品中含有的雜質(zhì)蛋白，溫育的時間，洗滌次數(shù)的長短都會不同程度的產(chǎn)生非特
7、異性反應(yīng)，從而對實驗結(jié)果造成影響，產(chǎn)生誤差。迄今為止，操作過程還未統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化，所以，有必要尋找一種新的更為有效的病毒檢測和分型的方法。1975年，E.SOUTHERN創(chuàng)立了印記轉(zhuǎn)移法，即分子分子雜交法，在此基礎(chǔ)之上延伸了NORTHERN法，其原翅RT-PCR酶切法對柯薩奇B組病毒的檢測和分型是RNA在甲醛凝膠電泳分離后，可以按其原順序在高鹽緩沖液中利用虹吸現(xiàn)象被轉(zhuǎn)移并被固定到一張硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，然后再與被標(biāo)記的RNA探針做分子雜交，結(jié)果膜上與探針雜交后的RNA分子便通過
