資源描述：
《柯薩奇b組病毒的race擴(kuò)增與序列分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、http://www.paper.edu.cn中國地方病學(xué)雜志2005年3月20日第鲞箜塑hj』!叢型2Q2，12，．·l6l··實(shí)驗(yàn)研究·柯薩奇B組病毒的RACE擴(kuò)增與序列分析李小光張鳳民馬培林陳小貝楊愛英【摘要】目的探討3’RACE(rapidamplificationofcDNAends)技術(shù)檢測柯薩奇B組病毒(CVB)的可行性，并建立相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)檢測方法。方法首先自行設(shè)計(jì)柯薩奇B組病毒6個型別病毒基因組的一條通用引物spl；然后從柯薩奇病毒(CVBl～CVB6)感染的Hela細(xì)胞，提取總RNA，用引物spl結(jié)合OligodT進(jìn)行3RA
2、CE擴(kuò)增，將產(chǎn)物克隆到pGEM—T載體上，挑取陽性菌落進(jìn)行序列測定，與標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行同源性比對。結(jié)果獲得了柯薩奇B組病毒6個型別的3末端擴(kuò)增產(chǎn)物及其核苷酸序列，同源性分析的結(jié)果顯示擴(kuò)增毒株與標(biāo)準(zhǔn)株之間的核苷酸同源性在95％～99％之間，氨基酸同源性在98％～100％之間。結(jié)論設(shè)計(jì)的引物“sDl”是柯薩奇B組病毒6個型別病毒基因組的一條通用引物；該引物結(jié)合OligodT進(jìn)行的3RACE擴(kuò)增可用于柯薩奇B組病毒的檢測?！娟P(guān)鍵詞】柯薩奇病毒B組；cDNA末端快速擴(kuò)增；序列分析中圖分類號：Q939．47文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：10o0—4955(200
3、5)02—0161—03Amplificationof3cDNAendofcoxsackievirusBbyRACEanditssequenceanalysisLIXiao—guang，ZHAGNFeng-min，MAPei—lin，CHENXiao—bei，YANGAi-ying．DepartmentofMicrobiology，HarbinMedico]University，Harbin150086，China【Abstract]ObjectiveToevaluatethepossibilitytodetectthecoxsackiev
4、irusB(CVB)by3RACE(rapidamplificationofcDNAends)，andtoconstructacorrespondingexperimentmethodtodetectCVB．MethodsUsing3RACEmethod，thespecialfragmentsofthe3endofCVBwereamplifiedfromthetotalRNAextractedfromtheHelacellinfectedbyCVB1～CVB6separatelyandthepositiveproductswereclone
5、dintopGEM．Tvectorandthensequenced，followedbycomparisonwiththestandardstrains．ResultsThespecialfragmentandthe．sequenceofthe3endofCVB1～CVB6wasobtained，thehomogeneityofnucleotideandaminoacidoftheDositiveclonestothatthestandardstrainswere95％～99％and98％～100％，respectively．Conclus
6、ionsTheDrimersp1iSprovedtobeacurrentprimerofCVB；andthemethodof3RACEdetectingtheCVBhasbeenconstructed．【Keywords】CoxsackievirusB；RapidamplificationofeDNAends：SequenceanalysisCLCnumber：Q939．47Documentcode：AArticleID：10004955(2005)02—0161-03柯薩奇病毒(Coxsackievirus)屬于小RNA病毒3RACE擴(kuò)增
7、，及序列分析，結(jié)果報告如下?？疲c道病毒屬，柯薩奇病毒分A、B兩組。其中B1材料和方法組有6個血清型，基因組含有一單正鏈RNA，全長1．1細(xì)胞和病毒：HeLa細(xì)胞用含10％FCS的16407389～7402bp，其3末端有PolyA。目前，有關(guān)該培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)；柯薩奇B組病毒(CVB1～CVB6)病毒與相關(guān)疾病，特別是克山病、心肌炎和心肌病為哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室保存毒株之間的關(guān)系，已經(jīng)獲得了一定的研究成果ll1。RACE1．2主要試劑：pGEM—T載體購自promega公司，技術(shù)是針對病毒的含polyA的mRNA進(jìn)行擴(kuò)增，AMV逆轉(zhuǎn)
8、錄酶和TaqDNA聚合酶購自TaKaRa公能提高檢測的準(zhǔn)確率有助于排除DNA污染所造成司。的假象。本實(shí)驗(yàn)以柯薩奇B組病毒6個型別為研究1．3病毒接種及總RNA的提?。撼Ｒ?guī)培養(yǎng)He
