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《柯薩奇b組病毒的race擴(kuò)增與序列分析》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、http://www.paper.edu.cn中國地方病學(xué)雜志2005年3月20日第鲞箜塑hj』!叢型2Q2,12,.·l6l··實(shí)驗(yàn)研究·柯薩奇B組病毒的RACE擴(kuò)增與序列分析李小光張鳳民馬培林陳小貝楊愛英【摘要】目的探討3’RACE(rapidamplificationofcDNAends)技術(shù)檢測柯薩奇B組病毒(CVB)的可行性,并建立相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)檢測方法。方法首先自行設(shè)計(jì)柯薩奇B組病毒6個型別病毒基因組的一條通用引物spl;然后從柯薩奇病毒(CVBl~CVB6)感染的Hela細(xì)胞,提取總RNA,用引物spl結(jié)合OligodT進(jìn)行3RA
2、CE擴(kuò)增,將產(chǎn)物克隆到pGEM—T載體上,挑取陽性菌落進(jìn)行序列測定,與標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行同源性比對。結(jié)果獲得了柯薩奇B組病毒6個型別的3末端擴(kuò)增產(chǎn)物及其核苷酸序列,同源性分析的結(jié)果顯示擴(kuò)增毒株與標(biāo)準(zhǔn)株之間的核苷酸同源性在95%~99%之間,氨基酸同源性在98%~100%之間。結(jié)論設(shè)計(jì)的引物“sDl”是柯薩奇B組病毒6個型別病毒基因組的一條通用引物;該引物結(jié)合OligodT進(jìn)行的3RACE擴(kuò)增可用于柯薩奇B組病毒的檢測?!娟P(guān)鍵詞】柯薩奇病毒B組;cDNA末端快速擴(kuò)增;序列分析中圖分類號:Q939.47文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:10o0—4955(200
3、5)02—0161—03Amplificationof3cDNAendofcoxsackievirusBbyRACEanditssequenceanalysisLIXiao—guang,ZHAGNFeng-min,MAPei—lin,CHENXiao—bei,YANGAi-ying.DepartmentofMicrobiology,HarbinMedico]University,Harbin150086,China【Abstract]ObjectiveToevaluatethepossibilitytodetectthecoxsackiev
4、irusB(CVB)by3RACE(rapidamplificationofcDNAends),andtoconstructacorrespondingexperimentmethodtodetectCVB.MethodsUsing3RACEmethod,thespecialfragmentsofthe3endofCVBwereamplifiedfromthetotalRNAextractedfromtheHelacellinfectedbyCVB1~CVB6separatelyandthepositiveproductswereclone
5、dintopGEM.Tvectorandthensequenced,followedbycomparisonwiththestandardstrains.ResultsThespecialfragmentandthe.sequenceofthe3endofCVB1~CVB6wasobtained,thehomogeneityofnucleotideandaminoacidoftheDositiveclonestothatthestandardstrainswere95%~99%and98%~100%,respectively.Conclus
6、ionsTheDrimersp1iSprovedtobeacurrentprimerofCVB;andthemethodof3RACEdetectingtheCVBhasbeenconstructed.【Keywords】CoxsackievirusB;RapidamplificationofeDNAends:SequenceanalysisCLCnumber:Q939.47Documentcode:AArticleID:10004955(2005)02—0161-03柯薩奇病毒(Coxsackievirus)屬于小RNA病毒3RACE擴(kuò)增
7、,及序列分析,結(jié)果報告如下??疲c道病毒屬,柯薩奇病毒分A、B兩組。其中B1材料和方法組有6個血清型,基因組含有一單正鏈RNA,全長1.1細(xì)胞和病毒:HeLa細(xì)胞用含10%FCS的16407389~7402bp,其3末端有PolyA。目前,有關(guān)該培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng);柯薩奇B組病毒(CVB1~CVB6)病毒與相關(guān)疾病,特別是克山病、心肌炎和心肌病為哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室保存毒株之間的關(guān)系,已經(jīng)獲得了一定的研究成果ll1。RACE1.2主要試劑:pGEM—T載體購自promega公司,技術(shù)是針對病毒的含polyA的mRNA進(jìn)行擴(kuò)增,AMV逆轉(zhuǎn)
8、錄酶和TaqDNA聚合酶購自TaKaRa公能提高檢測的準(zhǔn)確率有助于排除DNA污染所造成司。的假象。本實(shí)驗(yàn)以柯薩奇B組病毒6個型別為研究1.3病毒接種及總RNA的提?。撼R?guī)培養(yǎng)He