資源描述:
《HBcAb陽(yáng)性供肝組織內(nèi)cccDNA檢測(cè)及與肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)的關(guān)系》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào):I嶼12.6密級(jí):學(xué)位類別:科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位團(tuán)學(xué)校代碼:1062學(xué)號(hào):20102680學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)天洋醬科史粵TIA掛J
2、INM£OICALU糙IV囂RSll●Y碩士學(xué)位論文MLASTER’SDISSERl、ATION論文題目HBcAb陽(yáng)性供肝組織內(nèi)cccDNA檢測(cè)及與肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)的關(guān)系TITLETherelationshipbetweencccDNAofHBcAb—positivedonorlivertissueandhepatitisBrecurrenceafterlivertransplantation一級(jí)學(xué)科
3、:臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科:外科學(xué)普外論文作者:姜然然指導(dǎo)教師:張建軍教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外,論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名:塾箜日期:2013年5月,。Et學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的
4、全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文,并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)。保密口,在——年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密囪。(請(qǐng)?jiān)谙鄬?duì)應(yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名:導(dǎo)師簽名:日期:知B年娟D日日期:少,3年朋(D日天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要【目的】檢測(cè)乙肝核心抗體陽(yáng)性供肝組織內(nèi)HBVcccDNA,結(jié)合肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)率,探討HBcAb陽(yáng)性供肝中cccDNA與術(shù)后HBV復(fù)發(fā)的關(guān)系。【方法】實(shí)驗(yàn)分為兩部分。第一部分:建立檢測(cè)供肝組織中HBV
5、cccDNA的熒光定量PCR檢測(cè)體系。根據(jù)入組病例的種族和地理分布特點(diǎn),在GenBank選取HBV常見B、C基因型50株的全基因組序列,結(jié)合HBVrcDNA、HBVcccDNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)選擇相對(duì)保守的序列設(shè)計(jì)HBVcccDNA選擇性引物和探針。根據(jù)cccDNA的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特點(diǎn),利用PSAD消化去除rcDNA和整合型HBVDNA的干擾后,利用跨越缺口的選擇性引物擴(kuò)增,延長(zhǎng)到探針結(jié)合位點(diǎn)時(shí),利用其外切酶活性將探針切斷,產(chǎn)生熒光信號(hào)。以pCPl0質(zhì)粒構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,13-actin作為內(nèi)參照,對(duì)供肝組織提取的DNA樣本進(jìn)行PSAD消化后進(jìn)行c
6、ccDNA檢測(cè),確定引物的最佳退火溫度和檢測(cè)靈敏度。第二部分:HBcAb陽(yáng)性供肝組織內(nèi)HBVcccDNA的熒光定量PCR檢測(cè)與術(shù)后HBV的復(fù)發(fā)率的關(guān)系。2007年1月至2010年1月因乙肝相關(guān)性疾病在我院行肝移植手術(shù)患者1200例,根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組、入選標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn),選取病例共85例,其中男性65例,女性20例,年齡18.65歲,平均為44.55+12.37歲,隨訪18.60個(gè)月,平均隨訪32.12+10.06個(gè)月。分為實(shí)驗(yàn)組(HBcAb陽(yáng)性供肝、HBsAg陰性,n=40)、對(duì)照組(HBsAg陽(yáng)性供肝,n=15)、正常組(無(wú)肝炎供肝,n
7、=30)三組。入選標(biāo)準(zhǔn):1)年齡18.65歲,性別不限;2)HBsAg或HBsAg和DNA陽(yáng)性;3)簽署知情同意;4)預(yù)計(jì)術(shù)后存活6個(gè)月以上者。排除標(biāo)準(zhǔn):1)術(shù)前血清學(xué)HBsAg陰性;2)預(yù)計(jì)術(shù)后生存期<6個(gè)月者;3)存在其它肝炎病毒混合感染;4)HBV病毒變異者;5)嚴(yán)重藥物過敏者。利用第一部分創(chuàng)建的方法,檢測(cè)供肝組織內(nèi)的HBVcccDNA。所有患者肝移植術(shù)后給予HBIG聯(lián)合核苷類藥物預(yù)防乙肝復(fù)發(fā)方案。定期檢測(cè)HBV血清學(xué)及HBVDNA,如有HBsAg陽(yáng)性或HBV.DNA陽(yáng)性者取肝穿活檢病理確認(rèn)復(fù)發(fā)。計(jì)算乙肝復(fù)發(fā)率,探討HBcAb陽(yáng)
8、性供肝中cccDNA與術(shù)后HBV復(fù)發(fā)的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行x:檢驗(yàn)。p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?!窘Y(jié)果】天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文第一部分:成功建立了檢測(cè)供肝組織中HBVcccDNA的熒光定量PCR檢測(cè)體系。第二部分:入組患者共85例,實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及正常組分別有12例、11例和0例cccDNA檢測(cè)呈陽(yáng)性,其陽(yáng)性率分別為30%(12/40)、73.3%(11/15)、o。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的HBVcccDNA陽(yáng)性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=8.419戶O.004)。實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組及正常組術(shù)后HBV的復(fù)發(fā)率分
9、別為10%(4/40)、80%(12/15)和3.3%(1/30)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)后HBV的復(fù)發(fā)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(矛=25.913P<0.001)。實(shí)驗(yàn)組、正常組術(shù)后HBV的復(fù)發(fā)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(#=1.149