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《睪酮經(jīng)FasFasL信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)小鼠骨髓巨噬細(xì)胞凋亡》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文睪酮經(jīng)Fas/FasL信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)小鼠骨髓巨噬細(xì)胞凋亡姓名：金凌艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：艾曉杰;喬中東20060101睪酮經(jīng)Fas/FasL信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)小鼠骨髓巨噬細(xì)胞凋亡摘要凋亡又稱為程序性細(xì)胞死亡通過這一先天機(jī)制機(jī)體可以清除一些不需要的細(xì)胞與壞死不同凋亡是一種最普遍的生理性細(xì)胞死亡通常發(fā)生于胚胎發(fā)育組織重塑免疫調(diào)控以及腫瘤衰退過程中巨噬細(xì)胞作為一種重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞其在機(jī)體免疫中的作用不可忽視巨噬細(xì)胞的正常凋亡對(duì)其正常行使功能有著重要的意義很多因素可以
2、影響巨噬細(xì)胞的凋亡其中性激素是一個(gè)不可忽視的因素我們過去的研究表明睪酮Te能直接引起小鼠骨髓巨噬細(xì)胞BMM凋亡并伴有Fas和FasL表達(dá)的升高那么在睪酮誘導(dǎo)的小鼠骨髓巨噬細(xì)胞凋亡中Fas下游的一些關(guān)鍵的酶是否也參與了此過程實(shí)驗(yàn)?zāi)康?探究睪酮誘導(dǎo)小鼠骨髓巨噬細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)Fas/FasL途徑上caspase-8caspase-3和PARP的表達(dá)情況2阻斷Fas/FasL途徑中接頭蛋白FADD的表達(dá)后下游因子caspase-8表達(dá)的變化實(shí)驗(yàn)方法無菌條件下分離3周齡雌性小鼠骨髓細(xì)胞用含有生長(zhǎng)因子M-CSF1的L92
3、9條件培養(yǎng)基LCM誘導(dǎo)5天使之向巨噬細(xì)胞定向分化用流式細(xì)胞儀測(cè)定巨噬細(xì)胞純度并分選出F4/80陽性細(xì)胞并將細(xì)胞分為兩大組第一組分別是空白對(duì)照組睪酮100nM下同處理組去除M-CSF組去除M-CSF同時(shí)用雄激素處理組第二組用FADD反義寡核苷酸ASODN轉(zhuǎn)染BMMs后重復(fù)第一組的四個(gè)處理組并以FADD錯(cuò)義寡核苷酸MSODN轉(zhuǎn)染后的睪酮處理組作為對(duì)照處理12小時(shí)后分別通過凋亡梯形和流式細(xì)胞儀檢測(cè)第一第二組中BMMs的凋亡情況最后通過RT-PCRReal-timeRT-PCR和WesternBlot方法檢測(cè)各組中c
4、aspase-8caspase-3和PARP基因及蛋白的表達(dá)情況實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)67.2%的貼壁細(xì)胞是F4/80陽性細(xì)胞最大百分率可達(dá)69.7%這些F4/80陽性細(xì)胞即BMMs在第一組中除對(duì)照組外其他三組均出現(xiàn)了明顯的凋亡梯形第二組中經(jīng)FADD-ASODN處理的細(xì)胞其凋亡率明顯低于FADD-MSODN組Real-timeRT-PCR和WesternBlot結(jié)果也顯示在睪酮誘導(dǎo)下BMMs中caspase-8caspase-3和PARP的表達(dá)增高并激活蛋白酶原生成小片段而FADD的反義寡核苷酸能夠部分阻斷
5、由睪酮誘導(dǎo)的BMMs的凋亡使得caspase-8的表達(dá)也相應(yīng)減少實(shí)驗(yàn)結(jié)論1睪酮在體外直接作用于小鼠骨髓巨噬細(xì)胞后可誘導(dǎo)其凋亡22在睪酮誘導(dǎo)的小鼠骨髓巨噬細(xì)胞凋亡中伴有caspase-8caspase-3和PARP的活化3FADD反義寡核苷酸能抑制睪酮誘導(dǎo)的小鼠骨髓巨噬細(xì)胞的凋亡4在由睪酮誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡中當(dāng)Fas/FasL途徑上FADD的表達(dá)被抑制后其下游的caspase-8表達(dá)也被抑制關(guān)鍵詞睪酮凋亡小鼠骨髓巨噬細(xì)胞Fas/FasL信號(hào)傳導(dǎo)途徑反義寡核苷酸3TESTOSTERONEINDUCESAPOPTO
6、SISVIAFAS/FASLPATHWAYINBONEMARROW-DERIVEDMACROPHAGESABSTRACTApoptosisorprogrammedcelldeathistheinnatemechanismbywhichtheorganismeliminatesunwantedcells.Incontrasttonecrosis,apoptosisisthemostcommonphysiologicalformofcelldeathandoccursduringembryonicdevelopm
7、ent,tissueremodeling,immuneregulationandtumorregression.Asakindofimportantimmuneeffectivecells,macrophagesplaysomerolesinimmunity,andthenormalapoptosisofmacrophagesifsignificantfortheirfunctions.Manyfactorscanaffecttheapoptosisofmacrophages,andsexhormoneisa
8、non-negligiblefactor.OurpastresearchhadprovedthattestosteronecouldinduceapoptosisofbonemarrowderivedmacrophagesofmiceindirectlywithenhancedexpressionofFasandFasL,thenwhethersomedownstreamkeyenzymesinFa
