志賀氏菌顯色培養(yǎng)基在飼料檢測中的應(yīng)用研究

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1、檢測分析TESTINGANDANALYSIS志賀氏菌顯色培養(yǎng)基在飼料檢測中的應(yīng)用研究111122323才讓卓瑪楊紅巖唐煜王翠英馮海霞張瑩蔡傳勇常運(yùn)朝車團(tuán)結(jié)（1.甘肅省獸藥飼料監(jiān)察所；2.甘肅省生物芯片工程實驗室；3.甘肅省功能基因組與分子診斷重點實驗室）摘要：探討志賀氏菌顯色培養(yǎng)基在飼料志賀氏菌檢測參照GB/T8381.2-2005進(jìn)行，檢驗結(jié)果均為陰性。中的應(yīng)用。將痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌1.2培養(yǎng)基及菌株和宋氏志賀氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌制備成10-5、10-6、10-7梯度稀釋的菌GN增菌液、HE瓊脂、SS瓊脂、麥康凱瓊脂、伊液，對志賀氏菌顯色培養(yǎng)基、HE瓊脂、SS

2、瓊脂、麥康凱瓊脂、紅美藍(lán)瓊脂（EMB）、三糖鐵瓊脂（TSI），以上培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)瓊脂進(jìn)行檢測靈敏度的評價。利用人工污染飼料均由甘肅省獸藥飼料監(jiān)察所實驗室自行配置。志賀樣品進(jìn)行顯色培養(yǎng)基和上述四種普通培養(yǎng)基檢出率的測氏菌顯色培養(yǎng)基購自青島海博。痢疾志賀氏菌、福試。結(jié)果表明：志賀氏菌顯色培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基的檢測靈敏度均為10-7；對混合污染樣品的檢測中，顯色培養(yǎng)基優(yōu)于氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌和宋氏志賀氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌普通培養(yǎng)基。志賀氏菌顯色培養(yǎng)基用于飼料志賀氏菌的檢株購自ATCC。金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、大測，具有菌落形態(tài)易于分辨的特點，適合于飼料中志賀氏菌腸桿菌、沙門菌、糞鏈

3、球菌均由甘肅省獸藥飼料監(jiān)的檢測。察所實驗室自行分離保存。關(guān)鍵詞：志賀氏菌；顯色培養(yǎng)基；飼料1.3方法1.3.1顯色培養(yǎng)靈敏度檢測志賀氏菌是一類兼性厭氧的革蘭氏陰性腸桿痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌菌，包括痢疾志賀氏菌（S.dysenteriae）、福氏志賀氏和宋氏志賀氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過GN增菌液增菌后，菌（S.flexneri）、鮑氏志賀氏菌（S.boydii）和宋氏志賀取100μL在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)16h，挑取單個[1]氏菌（S.sonnei）。志賀氏菌具有很強(qiáng)的侵襲能力，能菌落加入10mL0.9%的生理鹽水制備成細(xì)菌原液。夠侵入多種腸上皮細(xì)胞引起腸炎。據(jù)統(tǒng)計

4、1990-然后進(jìn)行10倍梯度稀釋，制備10-5、10-6、10-7菌液2009年亞洲有1.25億人受到志賀氏菌的感染，導(dǎo)致各10mL。分別取100μL涂布于志賀氏菌顯色培養(yǎng)[2]14000例的患者死亡。而動物源性飼料容易受到微基瓊脂平皿、麥康凱瓊脂平皿、EMB瓊脂平皿、HE生物的污染，隨后污染畜禽產(chǎn)品，繼而通過食物鏈引瓊脂平皿和SS瓊脂平皿，計數(shù)志賀氏菌菌落數(shù)，比[3]發(fā)人類疾病。為減少畜禽對志賀氏菌的感染，探索較各培養(yǎng)基的靈敏度。有效的檢測方法是非常有必要的。目前，飼料中志賀1.3.2人工污染樣品的制備及檢測氏菌的檢測方法是依靠普通細(xì)菌培養(yǎng)基培養(yǎng)法，再取上述制備每種標(biāo)準(zhǔn)菌

5、株的10-5～10-7菌液各將疑似菌落進(jìn)行生化鑒定和血清學(xué)檢測，操作繁瑣、1mL，分別加入經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)檢測為陰性的20份飼費事費力。本文對志賀氏菌顯色培養(yǎng)基在飼料中志料樣品中，每份10g，均勻混合后，按國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T賀氏菌檢驗中的應(yīng)用進(jìn)行了初步研究。8381.2-2005方法增菌，劃線接種志賀氏菌顯色培養(yǎng)基瓊脂平皿、麥康凱瓊脂平皿、EMB瓊脂平皿、1材料與方法HE瓊脂平皿和SS瓊脂平皿，觀察志賀氏菌在各培1.1飼料樣品養(yǎng)基上的檢出情況。飼料樣品來自甘肅省內(nèi)58家豬、牛、羊和雞養(yǎng)1.3.3志賀氏菌和非志賀氏菌混合污染樣品的檢測殖場（戶）的60份配合飼料。志賀氏菌的檢測方法將痢

6、疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏44TESTINGANDANALYSIS檢測分析菌和宋氏志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿培養(yǎng)基在菌落數(shù)量上沒有顯著差異（P>0.05）。結(jié)果菌、大腸桿菌、沙門菌、糞鏈球菌近似等比例混合表明，志賀氏菌顯色培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基在檢測靈-5-7后，10倍梯度稀釋成10～10不同濃度的混合菌敏度上相當(dāng)。液，各取1mL分別加入到10g飼料中，按國家標(biāo)準(zhǔn)2.2人工污染樣品的檢測結(jié)果GB/T8381.2-2005方法增菌后，劃線接種志賀氏菌痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌-5-7顯色培養(yǎng)基瓊脂平皿、麥康凱瓊脂平皿、EMB瓊脂和宋氏志賀氏菌10

7、～10濃度菌液污染飼料后，所平皿、HE瓊脂平皿和SS瓊脂平皿，置于37℃培養(yǎng)有稀釋度增菌后在5種培養(yǎng)基上都能檢出。4種志24h，觀察志賀氏菌在各培養(yǎng)基上的檢出情況。賀氏菌在志賀氏菌顯色培養(yǎng)基上顯白色或無色，有1.3.4實際樣品的檢測些宋內(nèi)氏志賀氏菌有藍(lán)色中心。在麥康凱瓊脂平從市場購買實際樣品共20份，按國家標(biāo)準(zhǔn)皿、EMB瓊脂平皿、HE瓊脂平皿和SS瓊脂平皿4GB/T8381.2-2005增菌后，劃線接種志賀氏菌顯色種培養(yǎng)基上為無色透明菌落。培養(yǎng)基平皿上，置于37℃培養(yǎng)24h后，觀察志賀氏2.3混合污染樣品檢驗菌的檢