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《人骨髓間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、原創(chuàng)性聲明本人聲明:所呈交的碩士學位論文，是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均己在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名:女”·61:})日期:o2,-4;年了月11,日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人同意學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門送交學位論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱。不同意學校及國家有關(guān)機構(gòu)有權(quán)公布論文的全部或部分內(nèi)容，并采用影印、縮印或其他復(fù)制手段
2、保存論文。論文作者簽“:’右券侮指導(dǎo)教師簽“:日期:伽}}‘華日期:v}9}}石`了提目的:建立有效分離和簡便鑒定骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)的方法，并觀測不同條件對骨髓間充質(zhì)干細胞生長的影響，為更進一步研究骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學特性提供理論基礎(chǔ)和實驗手段。方法:用密度為1.073g/ml的percoll從骨髓血中分離單個核細胞，利用貼壁篩選的原理，在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)條件下，對獲得的同源細胞群進行免疫細胞化學、電鏡和流式細胞儀檢測;并在培養(yǎng)基中加入成骨添加劑，觀察細胞的成骨潛能;同時觀察高糖和低糖培養(yǎng)基以及纖維連接素對間
3、充質(zhì)干細胞生長的影響。結(jié)果:利用percoll分離和貼壁篩選獲得的骨髓間充質(zhì)千細胞，是均一的同源細胞群，表達整合素CD29,翁附分子CD44和Flk-1;不表達CD34,CD45等造血細胞、白細胞相關(guān)抗原。成骨誘導(dǎo)后，骨髓間充質(zhì)干細胞出現(xiàn)鈣鹽沉積。高糖和低糖DMEM對原代骨髓間充質(zhì)干細胞生長的影響無明顯差別，但可影響傳代細胞的生長有影響。纖維連接素影響MSCs貼壁和增殖。結(jié)論:percoll梯度離心和貼壁篩選是獲得骨髓間充質(zhì)干細胞的有效方法;免疫細胞化學方法、電鏡、流式細胞儀及反向成骨誘導(dǎo)方法的聯(lián)合應(yīng)用能夠準確鑒定MSCs。低糖DMEM
4、是MSCs培養(yǎng)和擴增的適宜培養(yǎng)基。纖維連接素影響MSCs的生長特性，促進MSCs的貼壁和增殖。人骨髓間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)前言干細胞具有無限的自我更新能力，并可分化產(chǎn)生至少一種高度分化的子代細胞。干細胞始終存在于人體內(nèi)，包括處于發(fā)育早期的胚胎干細胞和存在于成年人體內(nèi)的成體干細胞。胚胎干細胞(embryonicstemcells,ES)是指從囊胚內(nèi)細胞團或?？芭呓?jīng)體外抑制分化培養(yǎng)分離的多能性細胞，具有發(fā)育的全能性，在一定條件下能夠向三個胚層的組織和細胞分化。目前，人的胚胎干細胞已從發(fā)育早期的囊胚期內(nèi)細胞團和原始生殖細胞中分離，并分別建系
5、成功。這將給移植治療、藥物開發(fā)及篩選、細胞及基因治療和生物發(fā)育的基礎(chǔ)研究等帶來深遠的影響，同時打開了在體外生產(chǎn)所有類型的可供移植治療的人體細胞、組織乃至器官的大門。但是，由于胚胎干細胞異體移植的免疫排斥問題以及其所涉及的法律和倫理道德問題，極大地制約了對它的研究和應(yīng)用。成體組織干細胞是指從胚胎、胎兒及成年個體各種組織中分離出的多能性干細胞。機體內(nèi)幾乎所有的組織都包含有干細胞，各種干細胞不僅可以縱向分化，而且還可以橫向分化，具有很強的實用性.目前，最常用、研究最為深入且最具有臨床應(yīng)用潛力的成體干細胞是骨髓間充質(zhì)干細胞。骨髓間充質(zhì)干細胞(m
6、esenchymalstemcells,MSCS)是一種具有多向分化潛能的干細胞，它可以向多種結(jié)締組織及部分來源于外胚層的組織分化，形成骨、軟骨、骨骼肌、肌健、韌帶、真皮、脂肪、骨髓基質(zhì)和神經(jīng)等1.21。利用它進行組織工程學研究有如下優(yōu)勢:①取材方便且對機體無害，間充質(zhì)千細胞可取自自體骨髓，簡單的骨髓穿刺即可獲得;②由于間充質(zhì)干細胞取自自體，由它誘導(dǎo)而來的組織進行移植時不存在組織配型及免疫排斥的問題;③由間充質(zhì)干細胞分化的組織類型廣泛，理論上講它能分化為所有的間充質(zhì)組人骨曲間充質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)織類型:將它分化為骨、軟骨或肌肉、肌健在
7、創(chuàng)傷性疾病中具有應(yīng)用價值;將它分化為心肌組織則有可能構(gòu)建人工心臟，在心臟病中有應(yīng)用價值;將它分化為真皮組織則在燒傷中有不可限量的應(yīng)用前景。因骨髓間充質(zhì)干細胞的多向分化潛能和強大的增殖能力，以及其易于從骨髓中分離及體外擴增純化，所以近年來在組織工程領(lǐng)域倍受重視，得到廣泛研究。然而，目前分離純化及體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞的方法尚無一致方案，有些方法相當繁瑣。尤其因為MSCs缺乏特異性的表面標記，對如何鑒定MSCs存在著不同的意見和看法.本研究的目的是建立有效分離和簡便鑒定骨髓間充質(zhì)干細胞的方法，并觀測不同條件對其生長的影響。我們聯(lián)合應(yīng)用密度
8、梯度離心和貼壁篩選的方法從骨髓中分離間充質(zhì)干細胞。通過免疫細胞化學、電鏡及流式細胞儀對其加以鑒定。反向證明了骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨潛能。并觀測不同條件對其生長的影響。為更進一步研究骨髓間充質(zhì)千細胞的生物學特
