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《大鼠骨髓間充質干細胞分離、體外培養(yǎng)和軟骨細胞表型定向分化的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、廣西醫(yī)科大學碩士學位論文大鼠骨髓間充質干細胞分離、體外培養(yǎng)和軟骨細胞表型定向分化的實驗研究姓名：丁曉飛申請學位級別：碩士專業(yè)：骨外科指導教師：趙勁民;楊志2003.5.1大鼠骨髓間充質干細胞分離、。體外培養(yǎng)和向軟骨細胞表型定向分化的實驗研究摘要目的：探討研究分離骨髓間充質干細胞(MSCs)并誘導其向軟骨細胞轉化的體外培養(yǎng)方法，同時從組織形態(tài)學對MSCs生長特征進行觀察，為軟骨組織工程的種子細胞來源提供實驗依據(jù)。^／方法：抽取大鼠四肢骨髓，Percoll梯度分離液離心分(離結合貼壁篩選法得到MSCs，在含15％FBS的低糖DMEM培養(yǎng)液中，置于37℃，5％C0
2、2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)lO-14d。傳代后以15％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液(含地塞米松10～mol／L，VitC50ug／m1)對其進行誘導培養(yǎng)。觀測在體外培養(yǎng)條件下MSCs的形態(tài)、生長特點和誘導培養(yǎng)后軟骨特異性基質的表達情況。結果：1、分離獲取了較高純度的MSCs，保持了細胞的活性。2、MSCs原代培養(yǎng)呈均勻分布的集落樣生長，呈長梭形：傳代培養(yǎng)中形態(tài)特性無明顯變化，細胞均質性明顯提高。3、各代培養(yǎng)中堿性磷酸酶染色均呈陰性；誘導后的細胞由梭形向多角形、多邊形轉變，對甲苯胺藍呈現(xiàn)強的異染性反應，II型膠原免疫組化陽性。／結論：1、采用Percoll梯度分離液離心分離
3、結合貼壁篩選法可獲得較高純度和活性的MSCs，是簡便有效、實用可行的方法。2、MSCs在體外培養(yǎng)條件下能大量增殖。通過離體培養(yǎng)，可使體內(nèi)環(huán)境下低豐度的MSCs實現(xiàn)數(shù)量擴增。3、MSCs在特定培養(yǎng)液的誘導下能向軟骨細胞表型轉化，并能分泌軟骨特異性基質，可成為軟骨組織工程較理想的種子細胞來源。關鍵詞：間充質干砌i骨旨細胞痞彝。軟骨分化尺文體外羅Anexperimentalstudyinisolation，cultureandchondrogenicphenotypedifferentiationofmesenchymalstemcells(MSCs)fromth
4、ebonemarrowofratsinvitro．AbstractObjective：Toexploreamethodofisolation，cultureandchondrocyticphenotypedifferentiationofmesenchymalstemcells(MSCs)fromthebonemarrowofratsinvitroandtoobservethebiologicalcharacteristicsofMSCshistomorphologicallyinordertoofferexperimentalreferenceforthe
5、resourcesofseedingcellsincartilagetissueengineering．Methods：ThebonemarrowwasaspiratedfromthebonesoflimbsoftheratsandwasisolatedbygradientcentrifugationinPercoll．ThemonouclearcellswerecollectedandculturedinDMEM-LGwith15％fatalbovineserum(FBS)．Culturesweremaintainedat37℃inhumidifiedat
6、mospherechambercontaining5％C02for310—14d．ThehigherpurityofMSCswereobtainedbytherepeatedremovalofnonadherentcells．ThepassagecellswereinducedinDMEM-HGwith15％FBS。19。mol／Ldexamethasone，50ug／mlVitC．Thechangesofmorphology，growthandproliferationinvitroandexpressionofspecificchondrogenicma
7、trixafterinducingwereobserved。Results：(1)MSCs，separatedfromthebonemarrowofrats，werecollectedinhigherpuritybygradientcentrifugationinPercoltandstillkeptthecells’activity．(國PrimaryMSCsproliferatedinvisiblesymmetriccolonieswithlong—spindleshape．Themorphologicalcharacteristicsofmarrow-
8、derivedMSCshadnochangeduri
