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《犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)后細(xì)胞表型變化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)后細(xì)胞表型變化作者：歐陽(yáng)輝，劉維永，衛(wèi)向陽(yáng)，顧春虎，宿學(xué)家，鄭奇軍，劉興光【關(guān)鍵詞】,間質(zhì)干細(xì)胞Primarystudyofcellphenotypeofisolatedandculturedcaninebonemarroesenchymalstemcellsinvitro 【Abstract】AIM:Toobservethephenotypechangesandbiologicalcharacteristicsofnaturallydifferentiatedcaninebonemarroesenc
2、hymalstemcells(BMSCs)anddifferentiatedafterinducedthecaninesbonemarroplification,thegroorphologyicroscopeandsomeantigensinedbyimmunohistochemistrystain.RESULTS:SH2,Vimentin,αSMA,collagenⅠandⅢinindisplayednegativereaction.Theinducedanddifferentiatedcellsshoininn［(50.2±2.
3、5)%］.ThepositiveexpressionofαSMAdecreasedto(42.3±1.6)%andthatofvimentinincreasedto(86.2±2.4)%.CONCLUSION:Thephenotypesandbiologicalcharacteristicsofnaturallydifferentiatedmyofibroblastoreactivethanthoseoffibroblastsandmoresuitabletobeusedasseedcellsinconstructingtissuee
4、ngineeringheartvalve(TEHV). 【Keyesenchymalstemcells;bonemarromunohistochemistry;canine 【摘要】目的：觀察犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）經(jīng)分離、自然擴(kuò)增及誘導(dǎo)分化后表型變化和生物學(xué)特性.方法：利用骨髓穿刺、percoll密度梯度法離心分離繼而貼壁篩選純化BMSCs進(jìn)行接種培養(yǎng)，體外擴(kuò)增；倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)學(xué)變化，并進(jìn)行相關(guān)抗原檢測(cè).結(jié)果：分離的細(xì)胞免疫組化顯示SH2,Vimentin,αSMA和collagenⅠ,Ⅲ均呈陽(yáng)性表達(dá)，其陽(yáng)性率分
5、別為(95.1±1.7)%,(64.4±2.2)%,(78.7±0.9)%,(78.3±1.4)%和(66.8±0.8)%；CD34,Ⅷ因子antigen和laminin的表達(dá)均為陰性.在加入bFGF等誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用下，可以誘導(dǎo)分化出成纖維細(xì)胞，其誘導(dǎo)分化率為(50.2±2.5)%.誘導(dǎo)后αSMA表達(dá)陽(yáng)性率下降為(42.3±1.6)%，vimentin表達(dá)陽(yáng)性率上升為（86.2±2.4）%，生長(zhǎng)擴(kuò)增能力強(qiáng)，2o齡，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供；DMEMLG(DulbeccoEaglesminimumessentialmedium，改
6、良Eagles培養(yǎng)液，低糖型）培養(yǎng)基，新生牛血清（FBS），胰蛋白酶(美國(guó)，Gibco公司)；MCDB201培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)專用青、鏈霉素、兩性霉素B混合液，MTT［3(4,5dimethylthiazol2yl)2,5diphenyltertrazoliumbromide四唑鹽］(美國(guó)，Sigma公司)；percoll分離液(含乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒1.073kg/L，美國(guó)，Pharmecia公司)；DMSO(dimethylsulfoxide，二甲基亞砜，美國(guó)，Amresco公司)；SH2mAb(Srchomology2，美國(guó)，B
7、D公司)；Ⅰ,Ⅲ型膠原mAb(NIDCR惠贈(zèng),美國(guó))；Vimentin,αSMA,CD34,Ⅷ因子,LamininmAb，PBS(phosphatebufferedsaline磷酸鹽緩沖液)，PV9000二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒、DAB顯色試劑盒(北京，中山生物技術(shù)有限公司)；倒置相差顯微鏡(德國(guó)，LEica公司)；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(HERAcell，德國(guó)，Heraeus公司)；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(美國(guó)，μQuant公司)；圖像分析：LEIcaQ570c真彩色圖像分析系統(tǒng)(德國(guó)，Leica公司)，數(shù)碼攝像機(jī)(JVCky30FBCCD,日本
8、，JVC公司). 1.2方法 1.2.1細(xì)胞原代培養(yǎng)與傳代無(wú)菌條件下通過(guò)犬雙側(cè)股骨大轉(zhuǎn)子穿刺獲取骨髓原液10~15mL/犬，重懸于20mLDMEMLG(含青霉素105u/L，鏈霉素100mg/L，兩性霉素B的混合液2
